鬼筆環(huán)肽-iFluor 555標(biāo)記

	貨號	23119	存儲條件	在零下15度以下保存, 避免光照
	規(guī)格	300 Tests
	Ex (nm)	557	Em (nm)	570
	分子量	~1300	溶劑	DMSO
	產(chǎn)品詳細(xì)介紹

簡要概述

產(chǎn)品外觀形態(tài)：液體（注：鬼筆環(huán)肽系列產(chǎn)品有固體和液體兩種，液體為DMSO溶解后的產(chǎn)品，則不需再溶解。）

這種橙色的熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（等同于555標(biāo)記的AlexaFluor®鬼筆環(huán)肽）與F-肌動蛋白選擇性結(jié)合，其光穩(wěn)定性比熒光素-鬼筆環(huán)肽綴合物要高得多。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)或無細(xì)胞實(shí)驗中用于標(biāo)記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白絲的結(jié)合比與肌動蛋白單體的結(jié)合要緊密得多，從而導(dǎo)致肌動蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，從而通過防止絲解聚而基本穩(wěn)定了肌動蛋白絲。而且，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細(xì)胞中不同濃度下的功能不同。當(dāng)以低濃度引入細(xì)胞質(zhì)時，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島”中，但它不會干擾應(yīng)力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動蛋白在細(xì)胞中分布的有效工具，方法是用熒光類似物標(biāo)記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動蛋白絲以進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的肌動蛋白絲以及體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)的重要工具。鬼筆環(huán)肽-iFluor 555標(biāo)記探針是AAT Bioquest為多色成像應(yīng)用提供的一種熒光鬼筆環(huán)肽衍生物。

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產(chǎn)品說明書

樣品分析方案

概述

在微孔板孔中制備樣品

從樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽-iFluor 555標(biāo)記溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘

清洗細(xì)胞在顯微鏡下觀察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心。

操作步驟

1.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽結(jié)合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應(yīng)等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度的制備需要根據(jù)實(shí)際而定。

2.染色細(xì)胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細(xì)胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定細(xì)胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細(xì)胞中，并在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘。

2.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。