細(xì)胞株名稱： Hacat人永生化表皮細(xì)胞

種屬：人

組織來(lái)源：皮膚

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

形態(tài)特征：上皮細(xì)胞樣

培養(yǎng)條件：

*培養(yǎng)基： DMEM（內(nèi)含2mM L-glutamine）+10%進(jìn)口胎牛血清。

培養(yǎng)條件：37℃   carbon dioxide(CO₂),5%

傳代方法：

收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。                    （一）如果細(xì)胞未超過80%匯合度時(shí)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶身消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細(xì)胞已超過80%匯合度時(shí)，可根據(jù)情況進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）潤(rùn)洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中1-3分鐘預(yù)熱，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻。                                                     4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5ml培養(yǎng)基的新皿中或者培養(yǎng)瓶中。                                                                    5. 2-3天換液一次。
注意：收到細(xì)胞后將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫1-2小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。傳代后細(xì)胞應(yīng)該用新鮮的培養(yǎng)液，原瓶的培養(yǎng)液不能再使用。在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

（收到細(xì)胞后3天內(nèi)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常請(qǐng)及時(shí)拍照并聯(lián)系）

凍存方法：

  凍存液：90%*培養(yǎng)液，10%DMSO

  儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存