我司供應(yīng)的生化檢測(cè)試劑盒，僅供科研使用。

商品介紹：

測(cè)定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

通用規(guī)則：

1、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

4、檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

7、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則：

1、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

4、檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

7、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

CNE1, 人鼻咽癌細(xì)胞系     Human

HT-29, 人結(jié)腸癌細(xì)胞     Human

T24, 人膀胱癌細(xì)胞     Human

5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系     Human

HCT116, 人結(jié)直腸癌細(xì)胞     Human

LncaP, 人前列腺癌細(xì)胞     Human

6-10B, 人鼻咽癌細(xì)胞系     Human

lovo, 人結(jié)腸癌細(xì)胞     Human

DU 145, 人前列腺癌細(xì)胞     Human

Hep-2, 人喉癌細(xì)胞系     Human

MDA-MB-231, 人乳腺癌細(xì)胞     Human

HL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞     Human

CaEs-17, 人食管癌細(xì)胞株     Human

MG-63, 人骨肉瘤細(xì)胞     Human

kasumi-1, 人白血病細(xì)胞株     Human

RBE, 人肝膽管癌細(xì)胞     Human

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞     Human

KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞     Human

QGY-7701, 人肝癌細(xì)胞     Human

PANC-1, 人胰腺癌細(xì)胞     Human

Girdin    肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體     根霉屬的菌

AKAP2    蛋白激酶A2抗體     戴爾根霉

AT2R2    血管緊張素Ⅱ受體2抗體     科恩根霉

ASH1L    ASH1蛋白抗體     華根霉

AADACL2    芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白2抗體     白腐菌

AAMP    血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移蛋白抗體     蕁麻青霉

AKR1B10    醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體     小刺青霉

AKR1C2    膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體     婁地青霉

ANGPTL3    血管生成素樣蛋白3抗體     產(chǎn)紫青霉

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶線(xiàn)粒體抗體     特異青霉

phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體     淡紫青霉

ATG16L2    自噬體ATG16L2蛋白抗體     島青霉

ACPT    睪丸酸性磷酸酶抗體     灰黃青霉

Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗體     園弧青霉=桔灰青霉

AKIP    極光激酶A相互作用蛋白1抗體     頂青霉

APOL6    載脂蛋白樣蛋白6抗體     黃綠青霉

ARTS    凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體     產(chǎn)黃青霉

A2LD1    A2LD1蛋白抗體     阿達(dá)青霉

輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體     擬青霉

AADAC    芳香乙酰胺脫乙?；缚贵w     棉鈴蟲(chóng)擬青霉

AADACL4    芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白4抗體     玫煙色擬青霉

AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體     露濕漆斑菌

測(cè)定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準(zhǔn)確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。