平板細(xì)胞克隆實驗
參考價 | ¥ 350 |
訂貨量 | ≥10件 |
- 公司名稱 伊萊博生物科技(上海)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2024/3/14 13:44:11
- 訪問次數(shù) 644
聯(lián)系方式:張經(jīng)理15221734409 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
克隆形成試驗是測定細(xì)胞增殖能力的有效方法之一,貼壁后的細(xì)胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。細(xì)胞克隆形成率表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量,可以反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
1.取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞,分別用0.25%ydbm消化并吹打成單個細(xì)胞,并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。
2.將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,每組細(xì)胞分別以每皿50、100、200個細(xì)胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動,使細(xì)胞分散均勻。置37℃ 5%CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2——3周。
3.經(jīng)常觀察,當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細(xì)胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10——30分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。
4. 將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,用肉眼直接計數(shù)克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細(xì)胞的克隆數(shù)。最后計算克隆形成率。