天氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測(cè)試劑盒2
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌 貝博生物
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/7/9 17:28:47
- 訪問次數(shù) 224
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保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項(xiàng)
開蓋后組份按要求條件保存。
有效期
6個(gè)月
檢測(cè)方法
微孔板，酶標(biāo)儀
適用樣本
血清、血漿、細(xì)胞、組織
產(chǎn)品應(yīng)用
微孔板，酶標(biāo)儀
儀器準(zhǔn)備
1.酶標(biāo)儀
2.離心機(jī)
3.水浴鍋
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.離心機(jī)
3.水浴鍋
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.蒸餾水
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.96孔板
3.吸頭
4.一次性手套
2.96孔板
3.吸頭
4.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
1.二硝基苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出，應(yīng)棄用。
2.由于賴氏法的特點(diǎn)，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)每個(gè)點(diǎn)做三管的重復(fù)測(cè)定，求出各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度均值，減去“0”號(hào)管吸光度均值后，對(duì)照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.血清中AST活性在室溫可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月。
4.成批樣本測(cè)定時(shí)，一般無需每份樣本都做自身血清對(duì)照，以試劑空白管代替即可。但對(duì)于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測(cè)。復(fù)測(cè)時(shí)，每份樣本都應(yīng)做自身血清對(duì)照。
5.嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會(huì)引起測(cè)定管吸光度增高，因此檢測(cè)該類樣本時(shí)應(yīng)做自身血清標(biāo)本對(duì)照。
6.當(dāng)樣本的酶活力大于190卡門單位時(shí)，應(yīng)將樣本進(jìn)行5-10倍稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
2.由于賴氏法的特點(diǎn)，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)每個(gè)點(diǎn)做三管的重復(fù)測(cè)定，求出各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度均值，減去“0”號(hào)管吸光度均值后，對(duì)照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.血清中AST活性在室溫可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月。
4.成批樣本測(cè)定時(shí)，一般無需每份樣本都做自身血清對(duì)照，以試劑空白管代替即可。但對(duì)于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測(cè)。復(fù)測(cè)時(shí)，每份樣本都應(yīng)做自身血清對(duì)照。
5.嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會(huì)引起測(cè)定管吸光度增高，因此檢測(cè)該類樣本時(shí)應(yīng)做自身血清標(biāo)本對(duì)照。
6.當(dāng)樣本的酶活力大于190卡門單位時(shí)，應(yīng)將樣本進(jìn)行5-10倍稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
使用方法
準(zhǔn)備樣品：
① 血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，
-20℃保存1個(gè)月有效，用于AST/GOT的檢測(cè)。
② 細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存1個(gè)
月有效，用于AST/GOT的檢測(cè)。
③ (選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)
計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的AST/GOT含量。
制作AST標(biāo)準(zhǔn)曲線：
1. 取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品一支，準(zhǔn)確加入丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1ml，配制成丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品100mM，4℃保存?zhèn)溆谩?br>2. 臨用前，取適量100mM丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液按1：49的比例混合，配制成2mM的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品。
3. 按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 混勻，向各管中加入二硝基苯肼顯色液20ul，混勻37℃孵育20分鐘后，加入AST顯色基液200μl，混勻。
5. 室溫放置5分鐘，酶標(biāo)儀505nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度。各孔吸光度均減去”0”號(hào)孔吸光度，所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對(duì)應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖。
AST酶促反應(yīng)：
1. 按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
2. AST檢測(cè)：混勻，室溫放置5min。酶標(biāo)儀505nm處檢測(cè)吸光度，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度值。
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)孔活力單位為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定管吸光度減去對(duì)照管吸光度后（A測(cè)定-A對(duì)照），從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得AST活力單位。
參考范圍：
成年健康人血清AST：8-28卡門單位/ml
① 血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，
-20℃保存1個(gè)月有效，用于AST/GOT的檢測(cè)。
② 細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存1個(gè)
月有效，用于AST/GOT的檢測(cè)。
③ (選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)
計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的AST/GOT含量。
制作AST標(biāo)準(zhǔn)曲線：
1. 取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品一支，準(zhǔn)確加入丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1ml，配制成丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品100mM，4℃保存?zhèn)溆谩?br>2. 臨用前，取適量100mM丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液按1：49的比例混合，配制成2mM的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品。
3. 按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 混勻，向各管中加入二硝基苯肼顯色液20ul，混勻37℃孵育20分鐘后，加入AST顯色基液200μl，混勻。
5. 室溫放置5分鐘，酶標(biāo)儀505nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度。各孔吸光度均減去”0”號(hào)孔吸光度，所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對(duì)應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖。
AST酶促反應(yīng)：
1. 按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
2. AST檢測(cè)：混勻，室溫放置5min。酶標(biāo)儀505nm處檢測(cè)吸光度，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度值。
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)孔活力單位為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定管吸光度減去對(duì)照管吸光度后（A測(cè)定-A對(duì)照），從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得AST活力單位。
參考范圍：
成年健康人血清AST：8-28卡門單位/ml
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