細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗外包CCK8技術(shù)服務(wù)

WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

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1.通常細(xì)胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予藥物刺激。

推薦操作：通常建議培養(yǎng)板邊孔不用于實(shí)驗，僅加入100μL的培養(yǎng)基以減少培養(yǎng)過程中蒸發(fā)的影響

2.每孔加入10微升增強(qiáng)型CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升增強(qiáng)型CCK-8溶液，其它情況以此類推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和增強(qiáng)型CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和增強(qiáng)型CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。

推薦操作：檢測前，用新鮮的培養(yǎng)基或不含血清的培養(yǎng)將CCK-8按1:10（CCK-8試劑：培養(yǎng)基）稀釋，混勻配成CCK-8工作液。然后吸去培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)上清，加入稀釋好的CCK-8工作液，100μL/孔。此操作可減少重復(fù)樣本間的誤差。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗情況而定，初次實(shí)驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗。

4.在450nm測定吸光度?？梢允褂么笥?00nm的波長，例如650nm，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。

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