產(chǎn)品簡介：

銀染是目前檢測 PAGE 膠蛋白質(zhì)條帶的最-靈敏的方法，MS（質(zhì)譜）是確定未知蛋白最-常用和最快-捷的方法，但將銀染得到的蛋白直接用于MS 分析有很多問題，其中最主要問題是常規(guī)銀染所使用的試劑（包括強(qiáng)氧化劑和醛類）容易使蛋白質(zhì)發(fā)生共價化學(xué)修飾， MS 分析得到的修飾后的氨基酸信息跟蛋白質(zhì)實(shí)際的沒有修飾的氨基酸信息并不相同。為了使銀染得到的蛋白質(zhì)可以用于 MS 分析，為此本公司開發(fā)MS 兼容型銀染試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.跟 MS 兼容。整個過程不使用能對蛋白質(zhì)進(jìn)行化學(xué)修飾的試劑，所得蛋白質(zhì)沒有發(fā)生化學(xué)修飾，故可直接用于后續(xù)的 MS（包括 MALDI-TOF-MS 和 ESI-MS）分析。

2.銀染的染色靈敏度比考馬斯亮藍(lán)染色高 100 倍左右，可達(dá) 0.2-0.6 ng 蛋白質(zhì)/條帶。

3.可用于各種 PAGE 膠，包括變性 PAGE 膠（如 SDS-PAGE，尿素-PAGE），非變性 PAGE 膠，IEF 膠（等電電泳膠），2D 膠等。

4.四種溶液都是現(xiàn)用現(xiàn)配，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性好。

5.本試劑盒足夠染色 10 塊 10×10 cm PAGE 膠。

6.蛋白銀染試劑盒（質(zhì)譜兼容型）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格材料

銀染溶液A 組分一5 g10 mL 本色瓶

銀染溶液A 組分二100 mL125 mL 本色瓶

銀染溶液A 組分三22.5 g×1060 mL 本色瓶

銀染溶液 B 組分5 g10 mL 棕色瓶

銀染溶液 C 組分一5 g×1010 mL 本色瓶

銀染溶液 C 組分二2 mL5 mL 本色瓶

10×銀染溶液 D200 mL250 mL 本色瓶

使用手冊1 份1 份

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。

自備試劑

MilliQ 水（或電導(dǎo)在 5M?以上的去離子水），分析純甲醇和分析純乙酸。

使用方法：

說明

所有溶液均需現(xiàn)配現(xiàn)用。以下操作是針對一塊 10×10 cm PAGE 膠需要 200 mL 各種溶液的比例配制，用戶可以根據(jù)自己 PAGE 膠的大小增減溶液的配制量。整個過程一定戴手

套操作，避免皮膚脫落角質(zhì)蛋白對實(shí)驗(yàn)的干擾。所用容器（如托盤）最好是干凈的玻璃容器。

一：配制 400 mL 固定液

1.將 160 mL 甲醇、40 mL 乙酸和 200 mL MilliQ 水充分混合后即得 400 mL 固定液，常溫放置待一次性使用。按一次銀染需要固定 2 次，每次需使用 200 mL 固定液。

二：配制 200 mL 銀染溶液 A

2.先配制銀染溶液 A 組分一母液：將銀染溶液 A 組分一干粉 5 g（本試劑盒提供）加入到裝有 100 mL 銀染溶液A 組分二的塑料瓶中，蓋緊蓋子后充分搖晃溶解即可。常溫放置待用。此溶液剩余的可 4℃長期保存。

3.將 60 mL 自備甲醇、8 mL 上步所得銀染溶液 A 組分一母液、1 瓶銀染溶液 A 組分三干粉（試劑盒提供）和 132 mL 自備的 MilliQ 水充分混合后即得 200 mL 銀染溶液 A。常溫放置待一次性使用。

三：配制 200 mL 銀染溶液 B

4.稱 0.5 g 銀染溶液B 干粉，溶于 200 mL 自備的 MilliQ 水中，充分混合后即得200 mL

銀染溶液 B。常溫放置待一次性使用。四：配制 200 mL 銀染溶液 C

5.將 1 份銀染溶液 C 干粉溶解在 200 mL 自備的 MilliQ 水（干粉不容易溶解，需充分

搖晃）即得銀染溶液 C（使用前還需要再加入 160 μL 溶液 C 組分二，但此時暫不加）。常溫放置待一次性使用。

五：銀染

6.PAGE 電泳（包括非變性 PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE 等）結(jié)束后，將PAGE 膠轉(zhuǎn)移到裝有 200 mL 固定液的瓷盤或玻璃盤中，搖晃 30 分鐘以去除干擾銀染的組分（如甘-氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等），倒掉固定液。注：此步非常重要，否則銀染背景會很高。

7.重復(fù)上步一次。

8.將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移到 200 mL 新鮮配制的銀染溶液A 中，室溫?fù)u晃 30 分鐘。

9.用 200 mL 自備的 MilliQ 水漂洗 3 次，每次 5 分鐘（不要延長或縮短）。

10.將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移到 200 mL 的銀染溶液B 中，室溫?fù)u晃 20 分鐘。

11.用 200 mL 自備的 MilliQ 水漂洗 2 次，每次 1 分鐘（不要延長或縮短）。

12.將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移到 200 mL 的銀染溶液C 中（使用前還需要往裝有銀染溶液C 的瓶中再加入 160 μL 溶液 C 組分二并充分混勻），室溫?fù)u晃直到蛋白電泳條帶顯現(xiàn)，此步一般需要 10 分鐘左右，具體時間取決于蛋白的濃度。

13.將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移到 200 mL 的銀染溶液 D 中（配制方法：180 mL MilliQ 水中加入

20mL10×銀染溶液 D，混勻即可），室溫?fù)u晃終止反應(yīng)。

14.用 200 mL 自備的 MilliQ 水漂洗 3 次，每次 5 分鐘（不要延長或縮短）。

15.切下蛋白電泳條帶或膠塊進(jìn)行后續(xù)的脫銀，原位 trypsin 酶解，多肽沉淀和 MS 分析（略）。

附MS 前處理步驟（僅供參考，本試劑盒不含相關(guān)試劑）

16.脫銀：將切下的銀染斑點(diǎn)或條帶用脫銀液（30 mM K3Fe（CN）3 和 100 mM Na2S2O3的 1：1 的混合液）處理直到黑色消失。

17.還原：將膠塊或膠條置于 10 mM DTT（溶劑為 50 mM NH4HCO3），56℃處理一小時。

18.烷化：將膠塊或膠條置于 55 mM 碘乙酰胺（溶劑為 50 mM NH4HCO3），室溫避光處理 45 分鐘。

19.原位 trypsin 酶解：將膠塊或膠條置于 10 ng/μL 測序級別的 trypsin 溶液中（溶劑為 25 mM NH4HCO3），37℃處理過夜。

20.多肽提?。河?5%三氟-乙酸抽提酶解液，再用 2.5%三氟-乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀物（多肽）最后溶于 0.5%三氟-乙酸中。

21.MS 分析：參考相關(guān)MS 儀器使用手冊。

選擇我們的蛋白銀染試劑盒（質(zhì)譜兼容型），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！