人真皮微血管內(nèi)皮原代細胞

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

人真皮微血管內(nèi)皮細胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細胞（MEC）在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域，由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比，對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內(nèi)皮細胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。

方法簡介：

公司實驗室分離的人真皮微血管內(nèi)皮細胞采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人真皮微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。(該細胞傳代次數(shù)有限約 2 代，建議客戶收到細胞后盡快安排后續(xù)實驗)

1、取出細胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。

3、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養(yǎng)基，用 PBS 清洗細胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中，37℃消化 3min 左右；顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養(yǎng)液終止消化。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基。

COC1 人卵巢癌細胞  SCaBER(人膀胱鱗癌細胞)     RNASET2 Others Human 人 RNASET2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 人細胞裂解液 小鼠原代腎近端小管上皮細胞 大鼠原代嗅球神經(jīng)元細胞

胎盤堿性0酸酶(ALPP)重組蛋白 Recombinant Alkaline Phosphatase, Placental (ALPP)

HIST1H3A Protein Human 重組人 Histone H3.1 / HIST1H3A / H3FA 蛋白

KLK13重組人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein

HA Protein H11N2 重組甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

SEMA3A重組人 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

大鼠組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)試劑盒 ，英文名： TIMP4 ELISA Kit

Mouse ai thyroid stimulating hormone receptor aibody (Ab) ELISA Kit 小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒

MousehepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit 小鼠乙型肝核心抗體(HBcAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanMaixGlaProtein,MGPELISAKit人基質(zhì)γ羧基谷蛋白

透射電鏡(TEM)制片處理包埋液A液：10毫升B液：30毫升

ELISAKitGzms-B大鼠顆粒酶B

兔素(Renin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子胰島素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人真皮微血管內(nèi)皮原代細胞小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heparan sulfate (HS) ELISA Kit 人類肝素(HS)試劑盒

Humanformylmethionine,fMetELISAKit 人甲酰甲硫(fMet)試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickensolubleE-selectin,sE-selectin試劑盒雞可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞PDGF-B蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseferritin,FEELISAKit小鼠鐵蛋白(FE)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

phospho-eIF4E(pSer209 0.5mgphospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 0酸化eIF-4E(Ser209)抗原

PVRL1重組人 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 Protein

HEXB Protein Human 重組人 Hexosaminidase B / HEXB 蛋白

CTSA Protein Human 重組人 Cathepsin A / CTSA 蛋白