cKO小鼠動物模型
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- 公司名稱 上海達為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/6/26 18:27:41
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制作動物模型 細胞培養(yǎng) 分子生物學檢測 病理學形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學檢測 提供培訓服務(wù)各種檢驗儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等
一、cKO小鼠模型的核心定義與技術(shù)原理
1. 基本概念
cKO小鼠是通過時空特異性基因敲除技術(shù)，在特定組織、細胞類型或發(fā)育階段選擇性失活目標基因的模型。其核心在于克服傳統(tǒng)KO（全身性敲除）的胚胎致死問題，實現(xiàn)基因功能的精準解析。
2. 分子機制：Cre-loxP系統(tǒng)
| 組件 | 功能 | 技術(shù)演進 |
|---|---|---|
| loxP位點 | 34bp回文序列，被Cre重組酶識別 | 通過同源重組或CRISPR插入目標基因兩側(cè) |
| Cre重組酶 | 介導loxP間DNA片段切除或反轉(zhuǎn) | 組織特異性啟動子（如Alb-肝臟、Nes-神經(jīng)元）控制表達 |
| 誘導型系統(tǒng) | 化學/光控激活Cre（如Tamoxifen誘導Cre-ERT2） | 實現(xiàn)時間可控敲除（Hayashi & McMahon, 2002） |
關(guān)鍵流程：
構(gòu)建flox小鼠（Flanked by loxP）：目標基因關(guān)鍵外顯子兩側(cè)插入loxP位點，未激活時基因功能正常。
與Cre工具鼠雜交：Cre在特定組織表達后切除floxed基因片段，實現(xiàn)條件性敲除。
二、cKO模型構(gòu)建的技術(shù)突破與挑戰(zhàn)
1. 技術(shù)瓶頸與解決方案
| 挑戰(zhàn) | 傳統(tǒng)限制 | 前沿突破 |
|---|---|---|
| 長片段敲除效率低 | 片段>5kb時陽性率驟降 | 藥康生物長片段技術(shù)（支持23Mb片段編輯） |
| Cre表達滲漏 | 非特異性重組致背景敲除 | Tet-On/Cre-ERT2系統(tǒng)精準誘導 |
| 多基因協(xié)同調(diào)控難 | 單一基因操作局限 | CRISPR-Cas12a聯(lián)用實現(xiàn)多基因條件敲除 |
2.
三、cKO vs. KO：核心差異與適用場景
1. 功能對比
| 特性 | 傳統(tǒng)KO小鼠 | cKO小鼠 |
|---|---|---|
| 基因缺失范圍 | 全身性 | 組織/時間特異性 |
| 胚胎致死規(guī)避 | 不可 | 可（如胚胎必需基因） |
| 研究焦點 | 基因全局功能 | 時空特異性機制（如遲發(fā)性病理） |
| 應(yīng)用案例 | Lep-KO（肥胖模型） | 神經(jīng)元特異性Tau敲除（阿爾茨海默?。?/td> |
2. 選擇指南
四、cKO模型的三大應(yīng)用場景
1. 胚胎致死基因研究
案例：DNA聚合酶β（Polβ）全身KO致胚胎死亡，但T細胞特異性cKO揭示其在免疫應(yīng)答中的功能（Gu et al., 1994）。
2. 組織特異性機制解析
神經(jīng)科學：多巴胺受體Drd2在神經(jīng)元cKO后，揭示其調(diào)控小膠質(zhì)細胞激活的途徑。
腫瘤免疫：PD-1在T細胞中條件敲除，驗證免疫檢查點阻斷療法的細胞特異性毒性。
3. 時序性病理模擬
誘導型系統(tǒng)：Tamoxifen激活Cre-ERT2，在成年小鼠中敲除Alzheimer相關(guān)基因App，模擬遲發(fā)性神經(jīng)退行。
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