試劑名稱：DRAQ5 遠(yuǎn)紅外DNA熒光染料

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

CAS NO：254098-36-7

分子式：C22H28N4O4

分子量：412.54

一、描述與基本特性：

DRAQ5 遠(yuǎn)紅外DNA熒光染料，具有細(xì)胞通透性，適用于固定/非固定（活）細(xì)胞的染色，可與GFP、FITC等熒光標(biāo)記聯(lián)合使用，無需RNase處理或熒光補(bǔ)償。

其優(yōu)勢(shì)在于無光漂白效應(yīng)，且熒光強(qiáng)度與核DNA含量成比例。

光譜特性

參數(shù)：激發(fā)波長（Ex）

數(shù)值： 647 nm

參數(shù)：發(fā)射波長（Em）

數(shù)值：680nm

DRAQ5的發(fā)射波長與可見光區(qū)（如GFP和FITC）重疊較小，因此在多重?zé)晒鈽?biāo)記中具有良好的兼容性 。

DRAQ5的熒光強(qiáng)度與細(xì)胞中的DNA含量成正比，且結(jié)合DNA時(shí)無顯著熒光增強(qiáng)，使其在細(xì)胞周期分析和DNA定量中具有優(yōu)勢(shì) 。

二、常見問題解答

【1】問：Draq5 儲(chǔ)液是否含 DMSO？

答：該品為水溶液形式，不含 DMSO。

【2】問：用 Draq5 對(duì)小鼠細(xì)胞進(jìn)行2-3小時(shí)的活細(xì)胞成像。在對(duì)Draq5染色的細(xì)胞成像多久之后，在細(xì)胞毒性產(chǎn)生并使細(xì)胞死亡之前可以停止成像？

答：“Draq5 染色在 37°C 下加速，孵育時(shí)間（5-30 分鐘）可能會(huì)縮短”，但這應(yīng)該通過滴定和每種細(xì)胞類型進(jìn)行分別測(cè)定。

在未添加任何激動(dòng)劑/拮抗劑之前，可以在 1μM 的檢測(cè)持續(xù)時(shí)間（通常為 0.5-3 小時(shí)）將 Draq5 添加到檢測(cè)培養(yǎng)基中。

Draq5 染色發(fā)生快，因此建議在分析前將 Draq5 添加到活細(xì)胞中。細(xì)胞的孵育時(shí)間不應(yīng)超過 3 小時(shí)，但可能會(huì)因細(xì)胞系而異。

【3】問：使用 Draq5 對(duì)上皮癌細(xì)胞的細(xì)胞核進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)熒光隨著時(shí)間的推移變得越來越強(qiáng)。這種影響在激光功率較高和受熱時(shí)發(fā)生強(qiáng)烈。這可能是什么原因呢？

隨著時(shí)間的推移，越來越多的染料與細(xì)胞核的 DNA 結(jié)合嗎？

它是否僅在與核 DNA 反應(yīng)時(shí)發(fā)出熒光？是否知道染料在細(xì)胞凋亡過程中的行為。

當(dāng)染料變少時(shí)，染料能否與細(xì)胞核的DNA 結(jié)合得一樣好？

答：可以確認(rèn) Draq5 染色在較高溫度下增強(qiáng)，因此可能需要調(diào)整孵育期。孵育期越長，我們預(yù)期的信號(hào)就越多，直到 DNA 飽和。

如果 Draq5 隨后被清洗，我們預(yù)計(jì)染色會(huì)隨著時(shí)間的推移而緩慢下降。

除非 Draq5 與 dsDNA 結(jié)合，否則它幾乎不會(huì)發(fā)出熒光。只有當(dāng)它嵌入 dsDNA 中時(shí)，它才會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號(hào)。

Draq5 染色在細(xì)胞凋亡中不受影響，因?yàn)?Draq5 對(duì)dsDNA 的親和力在活細(xì)胞或死細(xì)胞中沒有差異。

隨著細(xì)胞凋亡中 dsDNA 的數(shù)量發(fā)生變化，Draq5 信號(hào)的強(qiáng)度也會(huì)隨著 dsDNA 的變化而變化。

三、應(yīng)用場(chǎng)景

【細(xì)胞核染色與DNA定量】

活細(xì)胞/固定細(xì)胞：穿透細(xì)胞膜標(biāo)記細(xì)胞核，區(qū)分有核/無核細(xì)胞，分析染色體倍性及細(xì)胞周期（G1/S/G2期）。

多通路檢測(cè)：與GFP、FITC等可見光區(qū)染料兼容，替代Hoechst/DAPI等藍(lán)色探針，避免光譜重疊。

【實(shí)驗(yàn)平臺(tái)兼容性】

流式細(xì)胞術(shù)：488 nm激發(fā)時(shí)用685 LP二向鏡+710/50通道；633 nm激發(fā)時(shí)用660/20通道。

顯微成像：激光共聚焦/CCD相機(jī)觀察，推薦633/647 nm激發(fā)，發(fā)射濾片選695L/715LP/780 LP。

高內(nèi)涵篩選（HCS） ：自動(dòng)化兼容，無需洗滌步驟。

以上由西安強(qiáng)化生物小編xxn整理

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