總大腸菌群成品試劑使用說明書

  方法：品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基濾膜法

  方法來源：GB/T5750-2006

  應(yīng)用范圍：飲用水、出廠水、水源水、廢水、泳池水等

  測定步驟：

◆注意：為防止收到空氣、輔助實驗器皿、操作人員等環(huán)節(jié)帶入細菌污染，請在無菌環(huán)境下 操作并做好各環(huán)節(jié)的滅菌工作。

1 、將濾膜放入沸水中 煮沸滅菌 3 次，每次 15 分鐘。每次均需換 水。滅菌后備用。

2 、將試劑放入沸騰的水 中（鍋里放有鐵架），將 培養(yǎng)基煮至融化完全后， 取出備用。

3、在酒精燈上將無菌 培養(yǎng)皿取出。

4、待步驟 1 培養(yǎng)基冷卻 至 50℃左右，在酒精燈 上方，將培養(yǎng)基導(dǎo)入培 養(yǎng)皿中。

5 、立即將培養(yǎng)皿平放 于 臺面上 ，旋搖培養(yǎng) 皿 ，將培養(yǎng)基放至凝 固，備用。

6 、用點燃的酒精棉球 火焰將杯蓋、濾杯、濾 膜底座和鑷子滅菌。

7、用滅菌的鑷子夾取一 片步驟 1 的無菌濾膜， 夾住邊緣，平貼到濾膜 底座上。

8 、安裝好抽濾裝置，倒 入 100mL 混勻的水樣并 抽濾，水干后再抽 5 秒即 可停止。

9 、取下濾杯，用滅菌 的鑷子取下濾膜

10、將濾膜平鋪于已經(jīng)凝固的步驟 5  的培養(yǎng)基上，細菌截留面朝上，避免 出現(xiàn)氣泡。翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，置于 37℃ 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 24 小時±2 小時， 記錄有金屬光澤或深紅色菌

提示：若特征菌落數(shù)過多，則將水樣稀釋適當倍數(shù)，經(jīng)過稀釋的水樣，最終結(jié)果需乘以 稀釋倍數(shù)。水樣稀釋、過濾及接種操作均為無菌操作。

  提示：若需做一平行樣，只需將平行的濾膜鋪于同一塊培養(yǎng)皿中即可實現(xiàn)。

  提示：為避免出現(xiàn)假陽性或者假陰性菌落可進一步進行革蘭氏染色、鏡檢和乳糖蛋白胨 再培養(yǎng)。