改良羅氏藥敏培養(yǎng)基
- 公司名稱 宜康達科技(廣州)有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 國產(chǎn)
- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2025/8/5 11:24:54
- 訪問次數(shù) 813
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藥敏改良羅氏培養(yǎng)基(比例法)說明書 | |||||||||||||||||||||||||
【產(chǎn)品名稱】 【儀器設備】 本實驗需要主要的儀器設備有生化培養(yǎng)箱、生物安全柜、接種環(huán)、麥氏比濁管()、移液槍(或移液管)、高壓滅菌鍋; 【操作方法】 1、菌液濃度標定及接種菌液的準備: 1.1 樣品來源于液體培養(yǎng)基: 液體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)結核分枝桿菌陽性或復蘇培養(yǎng)的結核分枝桿菌,取培養(yǎng)2周以內(nèi)菌液,經(jīng)4000g,15分鐘離心,取沉淀。沉淀用無菌0.5%Tween80生理鹽水稀釋,與標準麥氏比濁管(MacFarland )比濁,即配成1mg/mL的菌懸液; 1.2 樣品來源于固體培養(yǎng)基: 挑取固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的結核分枝桿菌菌落,利用無菌的0.5% Tween80生理鹽水溶解、稀釋,與標準麥氏比濁管(MacFarland )比濁,即配成1mg/mL的菌懸液; 附:麥氏1號比濁管的制備方法: 0.1mL 1%氯化鋇(BaCL2)加入9.9mL 1%硫酸(H2SO4),封口,比濁前搖勻。 1.3 菌懸液稀釋制備接種濃度: 比濁后的菌懸液, 利用無菌的 0.5% Tween80 生理鹽水10 倍比稀釋, 稀釋到接種濃度分別為: 10-2mg/mL和10-4mg/mL; 提示: ① 此操作要求在生物安全柜中進行; ② 菌液標定稀釋前,要保證菌樣沒有污染,如果菌樣中含有除了結核分枝桿菌,還存在其他抗酸菌,藥敏結果不準確; ③ 樣品來源于固體培養(yǎng)基,結核分枝桿菌*是在培養(yǎng)基上出現(xiàn)陽性克隆后,14天內(nèi)挑取,進行藥敏實驗; ④ 0.5%Tween80生理鹽水使用前,需要高壓滅菌; 2、接種: 接種濃度分別為10-2mg/mL和10-4mg/mL,標準接種環(huán)取0.01mL,分別接種到對照培養(yǎng)基及含藥培養(yǎng)基表面; 提示: 接種菌液盡可能均勻分散于培養(yǎng)斜面上; 3、培養(yǎng): 接種后的培養(yǎng)基置于斜面處37℃培養(yǎng),松開蓋子,培養(yǎng)24~48h后,旋緊蓋子繼續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)4周; 4周后,當對照培養(yǎng)管的菌體生長良好后,進行下一步菌體藥物敏感性鑒定,報告結果;如果對照培養(yǎng)管菌體沒有生長,重新實驗; 【結果判定】 菌液接種藥敏培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)4周后, (1)觀察培養(yǎng)結果: ① 無菌落生長:對藥物敏感 — ② 少于50個菌落:實際菌落數(shù); ③ 50~100菌落: 1+ ④ 100~200個菌落: 2+ ⑤ 大部分融合 (200~500個菌落) 3+ ⑥ 融合(大于500個菌落) 4+ (2)計算耐藥百分比: 如果耐藥百分比大于1%者報告耐藥;則認為受試菌對該抗結核藥耐藥;
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