菌落總數(shù)的快速測定方法
 

1 適用范圍：可用于各類食品及原料中菌落總數(shù)的測定。也可用于與食品接觸的容器、操作臺和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測。

2 方法原理：將營養(yǎng)培養(yǎng)基、凝膠和氯化三苯基四氮唑（TTC）顯色劑等加載在試紙片，經(jīng)加樣、培養(yǎng)后，細(xì)菌菌落在測試片上顯現(xiàn)出紅色菌斑，通過計數(shù)報告結(jié)果。

3 操作方法

3.1  樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，經(jīng)充分振搖（均質(zhì)）做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，用1mL滅菌吸管反復(fù)吸吹制成1:100的稀釋液。以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。

3.2  接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如食用純水和礦泉水等）可直接用原液檢測。將測試片放在水平臺面上，揭開上面的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央的紙片上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每個稀釋度接種兩片。

3.3  培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

4 結(jié)果判斷與計數(shù)：

4.1  細(xì)菌在紙片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（10個～100個）的紙片進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每克（或毫升）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按實有數(shù)報告。大于100時，用二位有效數(shù)字，二位有效數(shù)字后面的數(shù)字，以四舍五入方法計算，并以10的指數(shù)來表示。

4.2  計數(shù)原則與報告方式

4.2.1  通常選擇菌落在10個～100個之間的紙片進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見下表中例次1）。國家標(biāo)準(zhǔn)菌落總數(shù)報告方式術(shù)語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。

4.2.2  若有兩個稀釋度的菌落數(shù)在10個～100個之內(nèi)，兩者的比值小于2，則取其平均數(shù)，若大于2，則采用稀釋度小者報告。

4.2.3 若三個稀釋度的菌落數(shù)都有在10個～100個之內(nèi)時，應(yīng)選擇二個低數(shù)值的平均數(shù)。

4.2.4  若三個稀釋度的菌落數(shù)均小于10個或大于100個時，應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數(shù)；或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值，或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值。

5  表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

6  注意事項：使用過的紙片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。