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色譜填料的選擇

閱讀:1847      發(fā)布時間:2023-11-25
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  一、硅膠基質(zhì)填料
 
  1、正相色譜
 
  正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團,如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。
 
  由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其它極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小,即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。
 
  正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform)、二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
 
  2、反相色譜
 
  反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。
 
  樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份最先被沖洗出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
 
  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
 
  二、聚合物填料
 
  聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要優(yōu)點是在pH值為1~14均可使用。
 
  相對于硅膠基質(zhì)的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。
 
  現(xiàn)有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料,色譜柱柱效較低。
 
  三、其它無機填料
 
  其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),一般僅限于特殊的用途。如,石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),不再需其它的表面改性。
 
  該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體,又由于在HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何pH與溫度下使用。
 
  氧化鋁也可用于HPLC,氧化鋁微粒剛性強,可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,其優(yōu)點是可在pH高達12的流動相中使用。
 
  但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應(yīng)用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應(yīng)用。新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應(yīng)用pH范圍1~14,溫度可達100℃。
 
  由于氧化鋯填料是最近幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中。

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