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疏水作用色譜概述

閱讀:3720      發(fā)布時間:2016-1-20
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         疏水作用色譜始于1972年SHaltiel及其工作者,他們利用帶有碳?xì)浠衔锱浠沫傊悄z以“疏水親和色譜”分離蛋白 質(zhì)。在其他實驗室內(nèi)也進(jìn)行了類似研究和探索,1976年Hofstee將這種類型的色譜命名為疏水作用色譜。1980 年前后,不少學(xué)者就疏水作用的機(jī)理、分離規(guī)律等進(jìn)行了大量研究,但這些工作多是用軟或半硬基質(zhì)進(jìn)行的,其基本形式是將短烷基鏈鍵合于親水性基球上,作為配 基的烷基鏈的密度通常不大,且操作壓力和流速均不能提高。為改善HIC的分離效率和分離速度,出現(xiàn)了以硬質(zhì)高聚物微球、硅膠以及CPG為基質(zhì)的HIC 固定相。
    與其他類型相比,對用于這種填料的硅膠基質(zhì)并沒有特殊的要求,只要孔徑在25-100nm之間且有較大的比表面積就可以應(yīng)用,與對CPG的要求相似。只要經(jīng)過表面修飾或涂層,使其具有合適的親水表面和較弱的疏水基,就可以制備出疏水作用色譜。
    盡管曾研究過不同類型的疏水作用固定相,但有實用價值的主要是兩類。一類是在基質(zhì)表面鍵合上短鏈烷烴或苯基而成,例如,TOSOH公司的Pheny- TSK -Gel 3000SW、Butyl-TSK 3000 SW柱均是很典型的商品HPHIC柱。另一類是醚型鍵合相。在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷,再在路易士酸催化下接上短鏈烷氧基而成
               
如果將聚乙二醇與環(huán)氧化硅膠反應(yīng),則可制備出聚乙二醇型HIC 填料。作者的實驗室曾以可控孔徑玻璃為基質(zhì),鍵合以聚乙二醇,制備出HIC填料。這種填料,系無定型顆粒,粒徑分25-37及5-10μm 兩種??讖接?0、60 以及100nm等幾種。使用了分子量為400、600、800、1000及2000的PEG為配基,研究了不同色譜條件下蛋白質(zhì)的分離行為。結(jié)果表明隨 PEG鏈長的增加,蛋白質(zhì)的保留加大,比較適宜的是PEG600-1000。對一般生化分離而言,孔徑30-60nm較為合適。以結(jié)晶胰蛋白酶為樣品, 經(jīng).:( 分離后的活性回收率為近100%,表明這種.:( 填
料很適合于蛋白質(zhì)的分離。耿信篤等以硅膠為基質(zhì),以改性聚乙二醇為配基,制備了用 于蛋白質(zhì)分離的HIC 填料。在分離基因重組γ- 干擾素時發(fā)現(xiàn),干擾素的活性回收率有異乎尋常的升高。經(jīng)研究后認(rèn)為,這是由于HIC分離過程有利于變性蛋白的復(fù)性所致。這更加說明,HIC是生物大分子分 離和純化的一個重要的手段。

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