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操作分光光度計(jì)應(yīng)該注意哪些細(xì)節(jié)
閱讀：1035 發(fā)布時(shí)間：2023-7-20
分光光度計(jì)是一種廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室儀器，用于測(cè)量物質(zhì)在可見光、紫外光或紅外光等特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)光的吸收或透射程度。通過(guò)測(cè)量樣品對(duì)特定波長(zhǎng)的光的吸收或透射，可以得到關(guān)于樣品組成、濃度、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)等信息。
使用分光光度計(jì)需要注意以下幾點(diǎn)：
儀器檢查與校準(zhǔn)：在使用分光光度計(jì)之前，首先要進(jìn)行儀器檢查與校準(zhǔn)。檢查光源、光路、進(jìn)樣系統(tǒng)、檢測(cè)器等部分是否正常工作。校準(zhǔn)儀器確保其準(zhǔn)確性和精確性，并根據(jù)儀器型號(hào)和制造商的指導(dǎo)進(jìn)行校準(zhǔn)操作。這樣可以確保測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
樣品處理：在測(cè)量之前，樣品必須經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚?。例如，去除雜質(zhì)、溶解固體樣品、稀釋過(guò)濃縮樣品等。處理樣品時(shí)需要注意選擇適當(dāng)?shù)脑噭┖筒僮鳁l件，以避免對(duì)測(cè)量結(jié)果產(chǎn)生干擾。
光程長(zhǎng)度選擇：不同的樣品可能需要不同的光程長(zhǎng)度來(lái)獲得最佳的測(cè)量結(jié)果。根據(jù)樣品的吸光度范圍和濃度，選擇合適的光程長(zhǎng)度。較濃的樣品通常需要較短的光程長(zhǎng)度，而較稀的樣品則需要較長(zhǎng)的光程長(zhǎng)度。選擇合適的光程長(zhǎng)度可以避免過(guò)度飽和或信號(hào)弱的情況。
正確設(shè)置波長(zhǎng)：根據(jù)所需測(cè)量的物質(zhì)吸光度的波長(zhǎng)范圍，設(shè)置正確的波長(zhǎng)。確保選擇的波長(zhǎng)與樣品中的吸收峰重疊，以獲得最大的靈敏度和準(zhǔn)確性。在測(cè)量多個(gè)波長(zhǎng)時(shí)，確保在每個(gè)波長(zhǎng)之間進(jìn)行充分的沖洗，以避免波長(zhǎng)之間的互相干擾。
校正基線和參比溶劑：在測(cè)量過(guò)程中，校正基線是十分重要的。使用純凈的參比溶劑進(jìn)行基線掃描，并在樣品測(cè)量之前校正基線。這可以消除光源的漂移、光路的散射以及試劑的自身吸光度對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響。
避免外界干擾：在使用分光光度計(jì)時(shí)，應(yīng)盡量避免外界干擾因素的影響。例如，避免陽(yáng)光直射、電磁輻射、振動(dòng)等。確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安靜、穩(wěn)定，以保證測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。
控制溫度：某些實(shí)驗(yàn)可能需要在特定溫度下進(jìn)行測(cè)量，例如酶活性的測(cè)定。在這種情況下，應(yīng)使用恒溫水浴或恒溫箱來(lái)控制樣品的溫度。確保溫度的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，以提高測(cè)量結(jié)果的可靠性。
數(shù)據(jù)記錄與分析：在完成測(cè)量后，及時(shí)記錄測(cè)量結(jié)果，并進(jìn)行必要的數(shù)據(jù)分析。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，選擇適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)處理方法，例如構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算吸光度、濃度等。確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。