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臺盼藍(lán)的染色機(jī)理和應(yīng)用方法

時(shí)間:2010/1/14閱讀:4137
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臺盼藍(lán)染色:如果細(xì)胞膜不完整、破裂,臺盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞變藍(lán),即為壞死。如果細(xì)胞膜完整,細(xì)胞不為臺盼藍(lán)染色,則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。此方法對反映細(xì)胞膜的完整性,區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助。

用品:
1. 4%臺盼藍(lán)母液:稱取4g臺盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時(shí)。用PBS稀釋至0.4%。
2. 吸管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡

步驟:
1、制備單細(xì)胞懸液。并作適當(dāng)稀釋(10 *6 細(xì)胞/ml)
2、染色:取9mL細(xì)胞懸液移入試管中,加1mL0.4%臺盼藍(lán)溶液,混勻。
3、觀察

注意事項(xiàng):臺盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí),時(shí)間不宜過長。否則,部分活細(xì)胞也會著色,會干擾計(jì)數(shù)。

臺盼藍(lán)主要用來鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞分離后的存活情況,用0.4%臺盼藍(lán)直接染色,在顯微鏡下觀察即可,活細(xì)胞不被染色。方便易用,因此在實(shí)驗(yàn)室中比較常用,尤其在心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)中。

臺盼蘭染色法價(jià)格低廉,操作簡單,又不用無菌操作,做這個(gè)實(shí)驗(yàn)只要是把顯微鏡調(diào)好了,細(xì)胞濃度調(diào)好了就不會有問題,是一個(gè)養(yǎng)細(xì)胞的入門實(shí)驗(yàn),所以很適合初學(xué)者做。我做這個(gè)實(shí)驗(yàn)主要是用來確定抑制細(xì)胞增殖的藥物濃度,排除濃度過大引起的毒性反應(yīng)

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