電泳緩沖液是指在進行分子電泳時所使用的緩沖溶液，用以穩(wěn)定體系酸堿度。常見的核酸電泳緩沖液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。

作用

緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時正極與負極都會發(fā)生電解反應，正極發(fā)生的是氧化反應（4OH--4e->2H2O+O2)，負極發(fā)生的是還原反應（4H++4e->2H2)，長時間的電泳將使正極變酸，負極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應有較強的緩沖能力，使溶液兩極的pH保持基本不變。

電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢；太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。

電泳緩沖液還有一個組分是EDTA，加入濃度為1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等離子，防止電泳時激活 DNA酶，此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

特點

TAE是使用zui廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量（TBE中電泳時測出的相對分子質(zhì)量會大于實際分子質(zhì)量），且雙鏈線狀DNA其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小，長時間電泳不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。

TBE的特點是緩沖能力強，長時間電泳時可選用TBE，并且當用于電泳小于1kb的片段時分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結(jié)合的四羥基硼酸鹽復合物而使DNA段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。

配制方法

50×TAE Buffer 配制方法：

1。稱量氨基丁三醇 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L燒杯中；

2。向燒杯中加入約800ml去離子水，充分攪拌均勻；

3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；

4。用NaOH調(diào)pH至8.3，加去離子水定容至1L后，室溫保存。

使用時稀釋50倍 即1×TAE Buffer

10×TBE Buffer配制方法：

1。稱量氨基丁三醇 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L燒杯中；

2。加入約800ml去離子水，攪拌均勻；

3。用NaOH調(diào)pH至8.3，加去離子水定容至1L后，室溫保存。

使用時稀釋10倍 即1×TBE Buffer

相關文獻

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