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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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用中性粒細(xì)胞分離液提取中性粒細(xì)胞過(guò)程

時(shí)間:2010-10-22閱讀:4261
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銷(xiāo)售直線(xiàn):021-31322331、一、實(shí)驗(yàn)所需材料:

865512910、

hyf@ebioeasy.com

 

  1、中性粒細(xì)胞分離液(histopaque)

  2、全血

  3、Hanks液

  4、離心管若干

  5、離心機(jī)

  6、移液管,移液搶

  二、實(shí)驗(yàn)步驟

  1. 將所有試劑放至室溫。

  2、用離心管收集全血1-2ml

  3、加等體積的Hanks液至全血中組成

  4、加2ml中性粒細(xì)胞分離液至裝至離心管中。

  5、將全血和Hanks液加入分離液中

  6、4℃,900r/min離心8-10min血液此時(shí)應(yīng)該分為6層:血漿、單核細(xì)胞層、分離液、中性粒細(xì)胞、其余的分離液、紅細(xì)胞沉淀層。如果分層不是很明顯,會(huì)導(dǎo)致分離的細(xì)胞不純,則需要重復(fù)分離。

  7、用吸管小心地移去上面的三層(血漿、單核細(xì)胞和分離液)

  8、小心地吸取中性粒細(xì)胞層和其下面的分離液層,轉(zhuǎn)移至一個(gè)干凈的離心管中。

  9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min離心8-10min,棄上清,留沉淀,重復(fù)2次。

  10、如果細(xì)胞用來(lái)提RNA,可加Trizol 1ml保存。


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