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木聚糖酶活性測定方法分享

時間:2024/8/23閱讀:396
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木聚糖是一種存在于植物細(xì)胞壁中的多糖類物質(zhì),是植物半纖維素的主要成分。
木聚糖酶分布廣泛,可以從動物、植物及微生物體內(nèi)獲得。

檢測原理:
木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖,具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下,能夠和DNS試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。
通過反應(yīng)溶液的顏色的變化,來確定還原糖的含量。
因為還原糖的生成量和反應(yīng)液的木聚糖活力是成正比的,通過分光光度法可以測定,計算出樣品中的木聚糖酶活力。

檢測所用的試劑:
乙酸溶液、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS試劑。
所需要的儀器設(shè)備:
碾缽、分樣篩、分析天平、pH計、磁力攪拌器、電磁振蕩器、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、分光光度計等。

標(biāo)準(zhǔn)曲線:
吸取乙酸-乙酸鈉緩沖溶液4ml,加入DNS試劑5ml,沸水浴加熱5min,用自來水冷卻至室溫,用水定容至25ml,制成標(biāo)準(zhǔn)空白樣。
分別吸取木糖溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml,加入緩沖溶液定容至100ml,配制成0.1-0.7mg/ml的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
按照上述的標(biāo)準(zhǔn)溶液配制,分別做2次平行。吸取木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml,分別加入2ml水和5mlDNS試劑。
電磁振蕩3s,沸水加熱5min,用自來水冷卻至室溫,用水定容至25ml。
以標(biāo)準(zhǔn)空白樣作為對照,在540nm處測吸光度OD值。
以木糖濃度為Y軸,吸光度OD值為X軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

檢測過程:
吸取10ml木聚糖溶液,37℃平衡10min。
吸取10ml經(jīng)過稀釋的木聚糖酶溶液,37℃平衡10min。吸取2ml平衡過的木聚糖酶液,加入5mlDNS試劑,電磁振蕩3s。
加入2ml木聚糖溶液,37℃保溫30min。沸水浴加熱5min,用自來水冷卻至室溫,加水定容至25ml,電磁振蕩3s。
以標(biāo)準(zhǔn)空白樣為空白對照,在540nm處測定吸光度。以同樣的方法,加入2ml的木聚糖酶,電磁振蕩3s,37℃精確保溫30min,加入5mlDNS試劑,電磁震蕩3s,以終止酶解反應(yīng)。
沸水浴加熱5min,用自來水冷卻至室溫,加水定容至25ml,振蕩3s,以標(biāo)準(zhǔn)空白樣為空白對照,在540nm處測定吸光度。

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