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噬菌體制備及定量的一般實驗方案
閱讀：590 發(fā)布時間：2010-11-23大部分噬菌體展示方案都涉及這樣一個基本步驟：從被感染的細菌中制備噬菌體或噬菌粒顆粒的儲液（增殖），并滴定這些儲液以測定有感染力的顆粒的濃度。對于噬菌體載體（以及輔助噬菌體），對于噬菌體載體（以及輔助噬菌體），要通過計數(shù)宿主菌菌苔上的噬菌體斑來測定這些可變顆粒的濃度。為了確保能得到一個能繁殖的噬菌體的純培養(yǎng)物，任何時候增殖噬菌體載體或輔助噬菌體，按照這個步驟來進行噬菌斑的分離都是可取的。
對于噬菌粒載體，噬菌粒的滴定涉及對細菌的感染，以及對得到的抗生素耐受性的克隆的計數(shù)。
測定噬菌體或噬菌粒制備產(chǎn)物感染力的一個簡便的替代方案是通過吸光度評估濃度。消光系數(shù)（extinctioncoefficient）取決于噬菌體顆粒的大小，而噬菌體顆粒的大小又取決于基因組的大小。一般而言，對于一個輔助噬菌體如VCSMl3，lOD270=1．1X1013個顆粒／m1。但基于吸光度的計算可能對能繁殖的、有感染力的顆粒的濃度評估過高