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進行抗原暴露和熱誘導處理的主要原因
閱讀：618 發(fā)布時間：2011-6-20免疫組織化學染色除了具有的特異性抗體、敏感的檢測方法和熟練的組織制備技術外，還需掌握IHC染色前的處理方法，包括抗原的暴露和修復，雖然其作用機理尚不十分清楚，但很重要且實用。目前用于檢測石蠟切片的90％左右的商品化抗體需采用抗原修復或抗原暴露方法，才能檢測到滿意的陽性結果。
一、暴露和修復抗原的原因
在進行常規(guī)石蠟切片或存檔標本的回顧性研究時，必須進行酶消化或熱處理誘導抗原的修復來提高IHC檢測的敏感性，使許多原來僅表達在冰凍切片上的抗原能用于石蠟切片。主要通過酶消化使抗原決定簇暴露，熱誘導斷裂交聯(lián)、溶解變性蛋白等，有利抗原抗體結合，使IHC敏感性增加。進行抗原暴露和熱誘導處理主要有下列兩點原因。
（一）固定液的影響
甲醛在固定組織中所起的作用機理目前尚不十分清楚，其可能的機制是在用甲醛固定組織時，甲醛使蛋白質發(fā)生凝固，在發(fā)生凝固的過程中可引起蛋白質自身和不同的蛋白質之間通過甲基化橋使蛋白質發(fā)生交聯(lián)。交聯(lián)過程中可導致蛋白質的三級或四級結構的折疊方向發(fā)生改變，出現(xiàn)空間阻礙，同時抗原與其他分子間也會發(fā)生交聯(lián)，形成網(wǎng)絡結構而掩蓋抗原決定簇。蛋白質發(fā)生交聯(lián)的程度受甲醛溶液的pH值、溫度和固定時間的影響。為什么有些組織間質抗原，例如纖連蛋白（fibronectin）、各型膠原和層黏連蛋白（1aminin）等，必須用胃蛋白酶處理才能獲得良好的結果?而末見用熱處理修復抗原的方法獲得成功的報道?為什么有些抗原決定簇不受影響，不需要抗原修復?例如LCA、T細胞、B細胞、CK、EMA和波形蛋白（vimentin）等。有人認為，組織在脫水過程中對抗原性也有一定的影響，但無直接的證據(jù)。
（二）抗體制備的影響
抗體在制備過程中，尤其是單克隆抗體的制備，在篩選時一定要篩選能用于石蠟切片抗原決定簇的單克隆抗體。多克隆抗體絕大部分能用于甲醛固定的石蠟切片檢測，不需要抗原修復，部分抗體僅需酶消化，這可能與多抗的抗原決定簇眾多有關。但目前市售的大部分多克隆抗體均注明需高溫熱修復，令人比較難以接受。而單克隆抗體從理論上說是單一的抗原決定簇，雖然目前的絕大多數(shù)商品化單抗多是幾株混合出售，但與多抗相比還是比較單一。這里可能就存在某些對固定液較敏感的抗原決定簇空間結構位點易改變，而某些抗原決定簇就相對較穩(wěn)定。