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水產(chǎn)品中孔雀石綠固相萃取凈化方法
閱讀：4342 發(fā)布時間：2010-5-21
水產(chǎn)品中孔雀石綠固相萃取凈化方法
1. 樣品前處理
稱取5.00g切碎的樣品，依次加入1mL鹽酸羥胺（0.25g/mL）溶液、2mL對-甲苯磺酸（1.0mol/L）溶液、2mL乙酸銨緩沖溶液（0.1mol/L）和40mL乙腈，勻漿2min （10000r/min），離心3min（3000r/min），將上清液轉(zhuǎn)移到250mL分液漏斗中，用20mL乙腈重復(fù)提取殘渣一次，合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷、35mL水，振搖2min，靜置分層，收集下層有機(jī)層，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷萃取液，45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。
2. SPE凈化
a. 活化：PRS柱，依次用3mL乙腈、3mL甲酸溶液活化；中性氧化鋁柱，用5mL乙腈活化；
b. 上樣：將中性氧化鋁柱AL-N串接在PRS柱上方。用6mL乙腈分三次（每次2mL）用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物，并依次過柱，控制柱流速不超過0.6mL/min；
c. 淋洗：再用2mL乙腈淋洗中性氧化鋁柱后，棄去中性氧化鋁柱。依次用3mL 2%（v/v）甲酸溶液、3mL乙腈淋洗PRS柱，棄去流出液；
d. 洗脫：用4mL5%（v/v）乙酸銨甲醇溶液洗脫，洗脫流速為1mL/min，用10mL刻度試管收集洗脫液，用水定容至10.0mL，樣液經(jīng)0.2μm濾膜過濾，待測。
3. HPLC-MS/MS檢測
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件
a） 色譜柱：Pursuit C18柱，50mm×2.1mm×3μm；
b） 流動相：乙腈：5mmol/L乙酸銨（75:25, v/v）；
c） 流速：0.2mL/min；
d） 柱溫：35℃；
e） 進(jìn)樣量：10μL；
f ） 離子源： ESI，正離子；
g） 掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM。
4. 樣品組分
孔雀石綠、氘代孔雀石綠、結(jié)晶紫、氘代隱色孔雀石綠、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫
稱取5.00g切碎的樣品，依次加入1mL鹽酸羥胺（0.25g/mL）溶液、2mL對-甲苯磺酸（1.0mol/L）溶液、2mL乙酸銨緩沖溶液（0.1mol/L）和40mL乙腈，勻漿2min （10000r/min），離心3min（3000r/min），將上清液轉(zhuǎn)移到250mL分液漏斗中，用20mL乙腈重復(fù)提取殘渣一次，合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷、35mL水，振搖2min，靜置分層，收集下層有機(jī)層，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷萃取液，45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。
2. SPE凈化
a. 活化：PRS柱，依次用3mL乙腈、3mL甲酸溶液活化；中性氧化鋁柱，用5mL乙腈活化；
b. 上樣：將中性氧化鋁柱AL-N串接在PRS柱上方。用6mL乙腈分三次（每次2mL）用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物，并依次過柱，控制柱流速不超過0.6mL/min；
c. 淋洗：再用2mL乙腈淋洗中性氧化鋁柱后，棄去中性氧化鋁柱。依次用3mL 2%（v/v）甲酸溶液、3mL乙腈淋洗PRS柱，棄去流出液；
d. 洗脫：用4mL5%（v/v）乙酸銨甲醇溶液洗脫，洗脫流速為1mL/min，用10mL刻度試管收集洗脫液，用水定容至10.0mL，樣液經(jīng)0.2μm濾膜過濾，待測。
3. HPLC-MS/MS檢測
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件
a） 色譜柱：Pursuit C18柱，50mm×2.1mm×3μm；
b） 流動相：乙腈：5mmol/L乙酸銨（75:25, v/v）；
c） 流速：0.2mL/min；
d） 柱溫：35℃；
e） 進(jìn)樣量：10μL；
f ） 離子源： ESI，正離子；
g） 掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM。
4. 樣品組分
孔雀石綠、氘代孔雀石綠、結(jié)晶紫、氘代隱色孔雀石綠、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫
本方法中使用的SPE柱：
Bond Elut PRS（500mg,3mL, PN.12102039）和Bond Elut AL-N（1g,6mL, PN. 12256086 ）。
Bond Elut PRS（500mg,3mL, PN.12102039）和Bond Elut AL-N（1g,6mL, PN. 12256086 ）。
Tips:
本方法滿足國家標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的要求！
本方法滿足國家標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的要求！
我公司可提供產(chǎn)品： Bond Elut PRS（500mg,3mL, PN.12102039）
Bond Elut AL-N（1g,6mL, PN. 12256086 ）
北京東方惠普科技有限公司
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：徐兢苑