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武漢愛(ài)斯佩科學(xué)儀器有限公司

基因槍操作流程

時(shí)間:2011-8-23閱讀:3311
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基因槍微彈的制備:
1、EP管稱取60 mg (或3mg)金粉;
2、加入1ml (或50ul)無(wú)水乙醇,振蕩1min,10000rpm離心10S;
3、棄上清,加入1ml(或50ul) 無(wú)菌水洗,振蕩1min,10000rpm離心10S;
4、棄上清,加入1ml(或50ul) 無(wú)菌水洗,振蕩1min, -20℃;
DNA的包裹
1、50ul金粉懸液于EP管;
2、依次加入5ul/3ul質(zhì)粒DNA(1ug/ul),50ul 2.5M CaCl2 和20ul 0.1M亞精胺(每加完一樣可振蕩3S),靜置10min; 
3、振蕩3S,冰上10min,10000rpm離心10S,棄上清;
4、80ul無(wú)水乙醇,震蕩重懸,10000rpm離心10S,棄上清;
5、10ul無(wú)水乙醇定容(重懸);
6、每次用10ul點(diǎn)于微粒載膜中央,使其平鋪,晾至*干燥,待用;
基因槍的操作
1、打開(kāi)真空泵和基因槍的電源開(kāi)關(guān);
2、打開(kāi)氦氣瓶閥門,旋轉(zhuǎn)氦氣調(diào)節(jié)桿,使氣壓高于所選可裂膜壓力200psi左右;
3、旋下可裂膜擋蓋,將可裂膜放在擋蓋中央,將擋蓋旋上,用板水平加固;
4、把微粒發(fā)射裝置移出轟擊室,旋下蓋子,放入阻擋網(wǎng),把微粒載片安裝在固定槽中(有微粒的一面朝下),旋上蓋子,將發(fā)射裝置放回轟擊室;
5、將樣品盤放置在轟擊室的適當(dāng)位置,關(guān)上轟擊室門;
6、按VAC開(kāi)關(guān)(上檔)抽真空,當(dāng)表上讀數(shù)為所需值時(shí),開(kāi)關(guān)打到HOLD(下檔),然后按住FIER開(kāi)關(guān),當(dāng)達(dá)到適當(dāng)壓力可裂膜自動(dòng)破裂,松開(kāi)FIER開(kāi)關(guān);
7、開(kāi)關(guān)打到VENT(中間檔),以釋放轟擊室內(nèi)的真空;
8、打開(kāi)轟擊室門,取出樣品盤;
9、取出微粒發(fā)射裝置,卸下微粒載膜和阻擋網(wǎng)(阻擋網(wǎng)和微粒載膜放入70%的酒精浸泡);
10、旋下可裂膜擋蓋,清除可裂膜碎片;
11、若PDS—1000\He 型基因槍不再使用,關(guān)掉氦氣瓶的主閥,按住FIER開(kāi)關(guān),按住FIE開(kāi)關(guān),放掉氣體加速管內(nèi)的氦氣壓力,zui后關(guān)掉一切電源;
文章關(guān)鍵詞:基因槍

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