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北京索萊寶科技有限公司

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Bradford法蛋白濃度測(cè)定試劑盒

閱讀:1713      發(fā)布時(shí)間:2019-8-19
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Bradford法蛋白濃度測(cè)定試劑盒  

品牌:Solarbio | 貨號(hào):PC0010

 

英文名稱

Bradford Protein Assay Kit

儲(chǔ)存條件

BSA附件-20℃,其它試劑4℃,自訂購之日起九個(gè)月內(nèi)有效

單位

 

bradford蛋白定量試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容:

組成

包裝(2500微孔)

保存

5×G250染色液

100ml

2-8℃

PBS稀釋液

30ml

2-8℃

蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA)

1ml

-20℃

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的大吸收峰的位置(Imax),由465nm變?yōu)?95nm,在一定的濃度范圍內(nèi),測(cè)定的吸光度值A(chǔ)595與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM,但受略高濃度的去垢劑影響,需確保SDS的濃度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

 

操作說明:

一.微孔酶標(biāo)儀法 

1. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,取10ul,稀釋250ul ,使終濃度為0.2mg/ml。待測(cè)蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見,也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。 

2. 5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻,取1ml 5×G250染色液,加入4ml雙蒸水,混勻成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。 

3. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中,加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升。 

4. 將樣品作適當(dāng)稀釋(多做幾個(gè)梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差,標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。 

5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液,室溫放置3-5分鐘。

 6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定A595,或560-610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度。 

7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。 

二.分光光度計(jì)法 

如無酶標(biāo)儀,染色反應(yīng)可在離心管中進(jìn)行,反應(yīng)液混勻后加入比色皿中,使用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值。步驟如下:    

1. 取八支(或者更多)干凈的10ml離心管,標(biāo)記上號(hào)。

 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀釋終濃度為0.2mg/ml。 

3. 5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻,取10ml 5×G250染色液,加入40ml雙蒸水,混勻成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

 

4. 按下表加入試劑(以每孔5ml計(jì),多余的用來清洗比色皿)

 

5. 反應(yīng)3分鐘后測(cè)OD值。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,可每間隔2分鐘加一管染色液,每間隔2分鐘測(cè)一管OD值。如下表:

 

此圖為伯樂酶標(biāo)儀680,單波長(zhǎng),570nm測(cè)得。室溫反應(yīng)三分鐘

 

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