人ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）含量。實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）水平。用純化的人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF），再與 HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 （VEGF）濃度。試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶
7
終止液 6ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)品（2400pg/ml） 0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板 12孔 × 8條
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液 6ml×1瓶
10
說明書 1份
5
顯色劑 A液 6ml×1瓶
11
封板膜 2張
6
顯色劑 B液 6ml×1/瓶
12
密封袋 1個(gè)

人ELISA試劑盒標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零， 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止