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什么是標(biāo)準(zhǔn)特殊的蛋白分子量
最近更新時(shí)間：2011-3-15
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什么是標(biāo)準(zhǔn)特殊的蛋白分子量
特殊的分子量標(biāo)準(zhǔn)一般而言就是修飾標(biāo)記蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)嗎通常來將，它們都是western blot的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)
生物素標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
未染色的Marker在做Western時(shí)，需要在印跡前先用麗春紅或者是SYPRO熒光蛋白染色液等不干擾Western Blot的染色方法顯色，在膠上做標(biāo)記zui后才能“拼”在zui后的結(jié)果中，如果是預(yù)染的Marker就要在轉(zhuǎn)膜后標(biāo)記膜，或者剪膜，zui后在“拼上”。要是想直接將Marker結(jié)果顯示在zui后結(jié)果上，不用手工作圖或者拼接，那就要Western的Marker了。比如生物素標(biāo)記的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。這種方法主要是配合化學(xué)發(fā)光法：在蛋白分子量上標(biāo)記生物素，通過帶有抗生物素的抗體或者偶聯(lián)鏈親霉素的抗體，在化學(xué)發(fā)光檢測(cè)到目的蛋白帶時(shí)就可以同時(shí)看到相應(yīng)的分子量標(biāo)準(zhǔn)一起發(fā)光顯影了。不同于普通蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的便宜、預(yù)染蛋白分子量的方便，這一方法的優(yōu)點(diǎn)是與Marker和目的蛋白對(duì)應(yīng)性好，同時(shí)在同張片上顯示，不用拼接，利于分析。缺點(diǎn)是如果樣品中帶有生物素背景，那個(gè)抗生物素抗體有可能影響結(jié)果，而且反應(yīng)體系太過復(fù)雜也會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
特殊標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
在經(jīng)過修飾的蛋白標(biāo)準(zhǔn)中，除了生物素標(biāo)記以外，近些年由于下游蛋白操作的豐富化與復(fù)雜化，也出現(xiàn)帶有“尾巴”的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。比如His-Tag，如果每個(gè)Marker條帶都有His –tag，那二抗添加His-Taq抗體很容易將Marker條帶顯示在Western結(jié)果上。很方便，問題就是有可能有潛在的干擾，比如樣品中正好有類似Histag的結(jié)構(gòu)。不過這可以通過對(duì)照檢測(cè)的。這些經(jīng)過特殊標(biāo)記的蛋白Marker一般都不會(huì)影響目的蛋白的正常顯色，而且和目的蛋白顯色在同一張膜上，有時(shí)還可以作為陽性對(duì)照，但是各自的檢測(cè)顯色機(jī)制和效果又有一些區(qū)別。