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層析柱的使用

時間：2018-1-25閱讀：2120
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　　關(guān)于層析柱裝柱、使用及相關(guān)注意事項
 
　　(1)、裝柱前要仔細看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性，以及特殊的裝柱方法，針對不同的空柱，也要注意方法可能不同；
 
　　3、這一點非常重要：裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進入氣泡(bubble free)，柱頭事先也要排除氣泡。
 
　　(2)、填料要加水攪拌成均勻懸液，懸液濃度依填料而不同，一般70-85%，迅速倒入空柱內(nèi)，或吸或壓，流速和具體步驟看說明書。
 
　　(3)、所有柱子盡量做到填料均勻，尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后，可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2-4 倍，在此范圍內(nèi)越小越好。
 
　　(4)、選擇合適的泵，首先是流速滿足要求，脈沖盡量小。柱塞泵。
 
　　(5)、準備上柱的液體應(yīng)進行過濾，至少是0.45micrometre。
 
　　(6)、關(guān)于純化，首先要考慮的是你的目標：純度、數(shù)量、速度、收率等等，再根據(jù)樣品的具體情況，尤其是目標蛋白的性質(zhì)，確定純化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。*步先從大量或復(fù)雜樣品中將目標蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;，與主要雜質(zhì)分離；再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質(zhì)；zui后精細純化，提供純度至設(shè)定目標。到實際工作中，不要死靠三步，也許一步也許四步或更多，具體情況具體分析。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;只是一種思路而已。
 
　　(7)、至于測序，我想大概不到1mg 應(yīng)該足夠了。

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