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技術(shù)文章

ELISA結(jié)果造成假陽性的原因何在

閱讀:5188          發(fā)布時間:2015-8-27

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司技術(shù)明確表明ELISA實驗樣本要求: 血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測,嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性;血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/SPAN>

關(guān)于ELISA結(jié)果造成假陽性的原因我司技術(shù)做出如下原因分析: 

1.樣本嚴(yán)重溶血 ,以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性。

2. 混有紅細(xì)胞的血清沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有細(xì)菌污染 ,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng);

3. 標(biāo)本凝固不全 ,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;

4. 采血試管洗滌不* 、反復(fù)使用易交叉污染; 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ,樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

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