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技術(shù)文章

恒遠(yuǎn)技術(shù)深入剖析“標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果原因”

閱讀:3417          發(fā)布時(shí)間:2015-11-12

ELISA測(cè)定中出現(xiàn)的假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果,除了考慮試劑因素和操作因素之外,更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,從而提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。

血清是zui常用的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致。常常由于用于ELISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過(guò)久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。

(1)標(biāo)本溶血 由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。

(2)標(biāo)本受細(xì)菌污染 因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。

(3)標(biāo)本保存不當(dāng) 在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性;標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定,5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。

(4)標(biāo)本凝集不全 在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固,18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果;這類(lèi)情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用,解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?

(5)標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響 抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定干擾作用。 

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