化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題和解決方法
閱讀：1970 發(fā)布時(shí)間：2016-4-12免疫組化實(shí)驗(yàn)的不順心是否讓你很苦惱，來看看恒遠(yuǎn)為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥??！
染色過強(qiáng)
| 原因 | 解決方法 |
| 抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng) | 降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體） 抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4℃過ye |
| 孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃ | 一般室溫20-28℃ |
| DAB 顯色時(shí)間過長(zhǎng)或 DAB 濃度過高 | 顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) |
非特異性背景染色
| 原因 | 解決方法 |
| 操作過程中沖洗不充分 | 每步?jīng)_洗3×5 |
| 組織中含過氧化物酶未阻斷 | 可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時(shí)間延長(zhǎng) |
| 組織中含內(nèi)源性生物素 | 正常非免疫動(dòng)物血清再封閉 |
| 血清蛋白封閉不充分 | 延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間 |
染色弱
| 原因 | 解決方法 |
| 抗體濃度過低，孵育時(shí)間過短 | 提高抗體濃度，孵育時(shí)間不能少于60分鐘 |
| 試劑超過有效使用期 | 及時(shí)更換試劑 |
| 操作中，滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋 | 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥） |
| 室溫太低，低于15℃ | 若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過ye） |
| 蛋白封閉過度 | 封閉時(shí)間不要超過10分鐘 |
染色陰性
| 原因 | 解決方法 |
| 操作步驟錯(cuò)誤 | 重新試驗(yàn)，設(shè)立陽性對(duì)照 |
| 組織中無抗原 | 設(shè)立陽性對(duì)照片，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤 | 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤 |
對(duì)實(shí)驗(yàn)有任何問題和建議，對(duì)公司產(chǎn)品有任何疑問的，都咨詢或在線咨詢，上海恒遠(yuǎn)竭誠(chéng)為您服務(wù)！