徠卡顯微鏡-暗視野顯微鏡的使用

一、目的

了解暗視野顯微鏡的構(gòu)造和原理，掌握其使用方法。

二、原理

徠卡顯微鏡-暗視野顯微鏡是使用一種特殊的暗視野聚光鏡或暗視野聚光器，不讓光線直接照射被檢物體并進入物鏡，而是使光線只能從周緣進入并會聚在被檢物體的表面，利用被檢物體表面的反射光線來觀察物體的輪廓。暗視野顯微鏡適合于觀察在明視野中不易觀察的折射，如細菌的運率很強的物體，以及普通明視野顯微鏡看不到的微小顆粒（0.2—0.04μm）動或鞭毛等。

徠卡顯微鏡-暗視野顯微鏡有兩種主要類型：一種是折射型，即在普通聚光鏡放置濾光片的地方放上一個中心有光擋的小鐵環(huán)就成為一個暗視野聚光鏡。另一種是反射型，有不同形式的產(chǎn)品。

三、材料

1、菌種，枯草芽孢桿菌或大腸桿菌

2、儀器及其他，普通光學顯微鏡、暗視野聚光器、顯微鏡燈、蓋玻片（厚度1.0—1.2㎜）蓋玻片（＜0.17㎜）、香柏油、二甲苯、擦鏡紙等。

四、方法與步驟

1、安裝暗視野聚光器，取下普通聚光器，換上暗視野聚光器，上升聚光器使其透鏡頂端與鏡臺平齊。

2、調(diào)節(jié)光源，光源宜強，將光源的光圈開到zui大，聚光器光圈調(diào)至1.4如顯微鏡本身不帶光源，可用顯微鏡燈，調(diào)整好光源和反光鏡，使強光束正好落在反光鏡中央并反射入聚光器。

3、制片，取載玻片一塊，加一滴幼齡菌液，蓋上蓋玻片。注意不要有氣泡，載玻片和蓋玻片應非常清潔，無油脂、無劃痕，以免反射光線。

4、置片，加香柏油于聚光器透鏡的頂部，下降聚光器，然后把制片放置在載物臺上，并把標本移至物鏡下，升高聚光器，使鏡油與載玻片背面相接觸，避免產(chǎn)生氣泡。

5、調(diào)焦和調(diào)中，用低鏡進行，調(diào)節(jié)聚光器的高低，zui初可出現(xiàn)一個中間有一黑點的光環(huán)，再調(diào)至成為一個光點，光點愈小愈好。然后用聚光鏡的調(diào)中螺絲進行調(diào)節(jié)，使光點位于視野的中心，如圖1-2.

6、用油鏡觀察操作方法見實驗1.1可進一步微調(diào)聚光器和反光鏡使暗視野照明處于*狀態(tài)，并仔細調(diào)節(jié)粗、細調(diào)節(jié)螺旋，使菌體更清晰。

五、記錄結(jié)果

描述所觀察菌體的運動情況。

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