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胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.05%:0.02%,含酚紅)

時間:2019/1/10閱讀:2200
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胰蛋白-EDTA 溶液(0.05%:0.02%,含酚)

介:

胰蛋白(Trypsin)是由胰臟產生沒有活性的胰蛋白原分泌到小后,小內的腸肽 酶會活化該酶原,形成胰蛋白。胰蛋白的特點在于已經(jīng)活化的胰蛋白,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白原,這種過程即自催化。胰蛋白在小工作,它會將蛋白水解為肽,而分解氨基酸,其適溫度約為 37℃。Ø Trypsin-EDTA solution(0.05%:0.02%,含酚)0.05%0.02%EDTA、少量酚成,經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下 12min 左右就可以消化下大多數(shù)胞。

成:Trypsin-EDTA solution(0.05%:0.02%,含酚) 100ml -20℃

材料:

1PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)

2

3、 離心機

操作步驟(供參考)

1胞的消化

吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBSHanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。

加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.52min, 不同的胞消化時間有所不同。

察,胞明,并且肉眼察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明

化;或者用吹打發(fā)現(xiàn)細好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的  *胞培養(yǎng)液,吹打下胞,即可直接用于后續(xù)實驗。

如果發(fā)現(xiàn)消化不足,加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打胞,胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把胞全部吹打下來。10002000g 離心 1min,沉淀胞,盡量

去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新胞,即可用于后續(xù)實驗

2組織的消化

不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事

1、 盡量減少反復凍融的次數(shù),以免失效。

2、在使用 Trypsin-EDTA solution 程中,要特注意避免消化液被染。

3、Trypsin-EDTA solution 消化時間不宜過長,否則細板后生狀況會差。

4、了您的安全和健康,穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期: 12 個月有效。

 

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