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多模塊PCR的選擇要點(diǎn)有哪些？
閱讀：499 發(fā)布時間：2021-7-19
多模塊PCR是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
實時多模塊PCR技術(shù)不僅實現(xiàn)了對模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無污染的特點(diǎn)，使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。傳統(tǒng)的PCR進(jìn)行檢測時，擴(kuò)增反應(yīng)后需要進(jìn)行染色處理及電泳分離，并且只能作定性分析，不能準(zhǔn)確定量，易造成污染出現(xiàn)假陽性，使其應(yīng)用受到限制。
多模塊PCR的選擇主要看這些方面：
硬件設(shè)計：熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等，每種設(shè)計都有它的獨(dú)到之處但也都有無法避免的缺憾。
鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經(jīng)成為很多用戶頭痛的問題。在實驗過程中鹵鎢燈作為一種熱光源，產(chǎn)生較多熱能對實驗結(jié)果有一定的影響。CCD大的優(yōu)點(diǎn)就是可以同時掃描所有樣品中的熒光信號，但是靈敏度較低，而且同時檢測樣品間的熒光信號存在干擾。
運(yùn)行速度：在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數(shù)中，升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標(biāo)。更快的升降溫，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時間，提高PCR的特異性。
靈活性：大規(guī)模繁忙的實驗室設(shè)備固然讓人羨慕，但是常規(guī)實驗室同樣可以有精彩的選擇?，F(xiàn)在的儀器供應(yīng)商擁有眾多技術(shù)專家，有的還能提供整個分子生物學(xué)的基礎(chǔ)研究平臺，不但了解、滿足現(xiàn)在的需求，而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和更換模塊。
