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在酶聯(lián)免疫檢測中Z常見的標本有哪些

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一、培養(yǎng)細胞
    檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
二、組織標本
       切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
三、牛奶樣本的處理方法
    取10ml牛奶放入離心管,加入10ml乙酸乙酯,超聲震蕩30min,然后4000g離心10min(如兩相之間出現(xiàn)乳化層,則將樣品瓶放在80℃的水浴中約5min,再離心)移取1ml乙酸乙酯層至另外試管中,60℃氮氣流下蒸干,殘留物用緩沖液2ml緩沖后備用,前處理過程約需2小時。
四、血清
   室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
五、血漿
   應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
六、細胞培養(yǎng)上清
    檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
七、糞便樣本的處理方法
    對于糞便樣本的處理,一般要求采集干的糞便,稀的糞便不利于檢測(對樣本處理帶來難度,也會使準確性降低)。
    糞便樣本處理如下:
    ① 收集:直接用醫(yī)院臨床收集糞便的耗材進行收集;
    ② 采樣:一般選取的重量不能低于50mg,以1g為基準。稱取1g加9ml的PBS(磷酸鹽緩沖液,PH控制在7.2-7.4,濃度為0.01mol/L)換算成勻漿的比例就是10%;
    ③ 保存:勻漿后的樣本如果采樣周期在1周之內(nèi),可以保存在2-8℃,如果取樣周期在一個禮拜以上一個月以內(nèi),-20℃保存。如果取樣周期超過1個月,保存在-80冰箱!低溫保存的話,盡量避免反復(fù)凍融。
八、植物組織樣本的處理方法
    植物組織的提取,不管是根莖組織還是葉片組織還是果實組織,都應(yīng)該采用鮮重的計重方式,一般要遵循以下原則:
    ① 稱取的組織重量不能低于50mg。
    ② 勻漿的比例按照10%,即1g組織加9ml的勻漿液,勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)
    ③ 組織在勻漿器勻漿過程中,勻漿液應(yīng)該分2次加進去,這樣勻漿更充分。
    ④ 充分勻漿完成后離心取上清,離心機的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分,轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過5000.離心時間為15-30分鐘。
九、尿液
    用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

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