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公司動態(tài)

上海恒遠細說ELISA實驗之競爭法

閱讀:1350          發(fā)布時間:2017-7-25

    ELISA試劑盒由于其操作簡便,靈敏度高,是蛋白檢測技術(shù)中應(yīng)用zui廣泛的技術(shù)之一。用ELISA試劑盒實驗的方法有很多種,今天為大家講解ELISA實驗之競爭法!

    競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成反比。操作步驟如下:

   (1)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。
   (2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標本中無 抗原,則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標本中含有抗原,則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合,競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會,使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原,保溫后,酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達zui充分的量。洗滌。
   (3)加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標抗原zui多,故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標本中抗原含量越多。
Elisa間接法、競爭法、捕獲法,應(yīng)用親和素和生物素的ELISA

     親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每個分子由4個亞基組成,可以和4個生物素分子親密結(jié)合?,F(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素。生物素又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物,生物素-羥 基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合,雖不屬免疫反應(yīng),但特異性強,親和力大,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置,可以連接更多的生物素化的分子,形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來,就可大大提高ELISA的敏感度。

    上海恒遠為廣大客戶提供高質(zhì)量的免疫學和生命科學相關(guān)產(chǎn)品。質(zhì)量可靠,被全國各大院校科研機構(gòu)認可并為Elisa試劑盒標準品對照品長期供應(yīng)商。我們將以專業(yè)執(zhí)著,精益求精的精神服務(wù)于廣大科研用戶。

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