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技術(shù)文章

小鼠白介素1β試劑盒操作原理

閱讀:2248          發(fā)布時(shí)間:2011-9-27

                           小鼠白介素1β試劑盒操作原理

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                          96T
2.5ng/L-80ng/L
 
使用目的:
小鼠白介素1β試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素1β (IL-1β)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
   小鼠白介素1β試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠白介素1β (IL-1β)水平。用純化的小鼠白介素1β (IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素1β (IL-1β)再與HRP標(biāo)記的白介素1β (IL-1β)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素1β (IL-1β)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠白介素1β (IL-1β)濃度。
小鼠白介素1β試劑盒操作步驟
1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

80ng/L
5號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40ng/L
4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20ng/L
3號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ng/L
2號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5ng/L
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8。
2.有效期:6個(gè)月
上海恒遠(yuǎn)生物公司信譽(yù)*、質(zhì)量*、品牌*,打造優(yōu)良的服務(wù),專業(yè)供應(yīng)分子生物學(xué)試劑盒,ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,“小鼠白介素1β試劑盒”相關(guān)信息咨詢()!

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