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技術(shù)文章

恒遠生物|細胞復(fù)蘇

閱讀:959          發(fā)布時間:2024-3-21

細胞復(fù)蘇的原則


快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,對細胞造成損害。


一. 實驗前準(zhǔn)備:


1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃


2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。


3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。


二.取出凍存管:


1.根據(jù)細胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細胞的編號。


2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。


三.迅速解凍:


1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。


2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。


四.平衡離心:


用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min 


五.制備細胞懸液:


1.吸棄上清液。


2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液。


六.細胞計數(shù):


細胞濃度以5×105/ml為準(zhǔn)。


七.培養(yǎng)細胞:


將復(fù)合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液時間由細胞情況而定。


特別注意初學(xué)者常犯的錯誤:


1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。


2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長。


3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機損壞和細胞丟失。


4.一次復(fù)蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細胞交叉污染。

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