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核酸探針技術簡介
閱讀：3121 發(fā)布時間：2012-7-17核酸探針技術
核酸探針（又稱基因探針，gene-probe）技術，是20世紀晚期在生物學領域中發(fā)展起來的一項新技術，除可用于病毒、細菌等微生物的快速診斷外，還可用于研究病毒基因在組織細胞中的存在，研究基因是以游離的形式還是以整合的方式與宿主細胞DNA結(jié)合，研究基因在細胞或組織中的定位等。
（一） 基本原理
Waston-Crick發(fā)現(xiàn)的DNA雙螺旋模型已為大家所熟知。因為雙股DNA是一種非常穩(wěn)定的物質(zhì)，于0.3mol/L NaOH 中暴露于60℃下，也不被破壞，在近100℃加熱時，氫鍵雖可破壞，使DNA變成單股，但變性后的單股DNA還可結(jié)合在特定的載體如硝酸纖維素膜上，而標記的核酸（DNA或RNA）探針仍能與結(jié)合在膜上的單股DNA通過堿基互補配對原則形成氫鍵，又恢復成雙股，此時，或通過放射自顯影來觀察X光片中的特定核酸片段的蹤跡，或通過非放射性物質(zhì)標記后，觀察產(chǎn)生的特異顏色，以確定特定核酸片段的蹤跡。使單股重新聚合成雙股的過程稱為退火或復性，不同來源DNA分子之間的退火，則形成雜交。應用這種雜交技術可用以檢測和鑒定任何病毒或細菌的DNA分子等，核酸分子雜交可在DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA之間進行。根據(jù)雜交程度，可判斷兩個核酸分子之間核苷酸順序同源性的多少。
（二） 核酸探針檢驗的特點
雙股RNA比雙股DNA更穩(wěn)定，雜交后，經(jīng)嚴格沖洗，可洗去非特異結(jié)合的探針，還可用RNA酶來降解未雜交的RNA，小的RNA分子比大的DNA分子更易擴散進入薄膜，在原位雜交中獲得更大的信號與本底比率（signal to noise ratio），由此可見，用核酸探針檢測具有很大的優(yōu)點。
對于不易分離培養(yǎng)的微生物標本，及大量培養(yǎng)增殖后有“危險性”的病毒標本，均可用核酸探針直接檢測。另外，對病毒子或病毒抗原太少的標本，不易用常規(guī)方法，包括電鏡和血清學方法檢測的標本，也可用核酸探針檢測。本法還可用于對變異株病毒等的鑒定。
（三） 核酸探針的發(fā)展前景
近年來，隨著人們對基因精細結(jié)構(gòu)的深入細致的研究和DNA合成技術的發(fā)展，已經(jīng)能夠人工合成寡聚核苷酸片段作為探針來使用。這樣由于DNA探針來源比較豐富，所以，可提高探針濃度來縮短雜交時間。Rubin等用Whatman 541濾紙代替硝酸纖維素膜進行菌落雜交試驗，使操作過程方便簡單，并且可取消預雜交。非放射性標記物——生物素，正日益引起人們極大的興趣，是今后的發(fā)展方向。
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