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技術(shù)文章

試劑中常見的問題解析

閱讀:1865          發(fā)布時間:2013-4-7

生化試劑應用常見問題:
1 試劑空白
1 線性范圍變窄 現(xiàn)象:高值測不高。原因:生產(chǎn)試劑時有效成分投料量不足;試劑成份穩(wěn)定性較差。1.2 靈敏度變低現(xiàn)象:酶促反應速度曲線斜率下降,測定結(jié)果有嚴重系統(tǒng)誤差。原因:試劑底物濃度不足。1.3 低值偏高 現(xiàn)象:試劑空白的變化曲線(吸光度VS時間)明顯波動。原因:試劑自身不穩(wěn)定,自行分解;工具酶純度不夠,雜酶含量超限,導致干擾作用。
2 樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學反應的干擾。因此,應根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性,采用雙波長或多波長的檢測模式,并在結(jié)果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響,減少干擾程度。
3 測定范圍
每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍,樣品結(jié)果若超過此范圍,分析儀將顯示結(jié)果超過范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì),應更換合格試劑。
4 底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測法、兩點法測定酶活性時,若酶活性非常高,底物接近被耗盡,吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍,監(jiān)測期的吸光度將偏離線性,使測定結(jié)果不可靠。
5 酶的預活化
測定血清中的某些酶,如CK,離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過適當?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半胱氨酸。實驗研究證明,NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù)。在AST,ALT采用IFCC推薦方法測定時需要磷酸吡哆醛預活化。需要強調(diào):含有活化劑的生化試劑,其測定酶活性的結(jié)果要高些。
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