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技術(shù)文章

您的ELISA試劑盒比色結(jié)果的表達方法對了嗎?

閱讀:1921          發(fā)布時間:2017-12-20

您的ELISA試劑盒比色結(jié)果的表達方法對了嗎?


   比色效果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)則用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的標明方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,標明方法為"A492nm"或"OD492nm"。
   酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA試劑盒效果吸光度的光度計。關(guān)于固相載體方法的不相同,各有特制的適用于板、珠和小試管的規(guī)劃。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標儀。酶標儀的主要功用目標有:測讀速度、讀數(shù)的性、重復(fù)性、度和可測規(guī)劃、線性等等。優(yōu)異的酶標儀的讀數(shù)通??傻?.001,性為±1%,重復(fù)性達0.5%。舉例說,若某孔測得的A值為1.083,則該孔相關(guān)于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),重復(fù)測定數(shù)次,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標儀的可測規(guī)劃視各酶標儀的功用而不相同。通常的酶標儀在0.000~2.000,新類型的酶標儀上限拓寬達2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號標明。應(yīng)留心可測規(guī)劃與線性規(guī)劃的不相同,線性規(guī)劃常小于可測規(guī)劃,比如某一酶標儀的可測規(guī)劃為0.000~2.900,而其線性規(guī)劃僅0.000~2.000,這在定量ELISA中標準曲線時應(yīng)予留心。
   酶標儀不該安排在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,運用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,測讀效果更安穩(wěn)。
   ELISA試劑盒測讀A值時,要選用商品的活絡(luò)吸收峰,如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,在zui適波長(W1),第2次在不活絡(luò)波長(W2),兩次測定間不移動ELISA試劑盒板的方位。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,畢竟測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等形成的光煩擾。
  肉眼判斷結(jié)果時,顯色淺不易觀察,影響結(jié)果的準確性,必須使用酶標儀檢測,以保結(jié)果一致性。    

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