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培養(yǎng)細(xì)胞專題:實(shí)驗(yàn)小白變大神只需要搞清楚這8個(gè)點(diǎn)

閱讀:1413          發(fā)布時(shí)間:2019-12-3

    細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基,雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異,但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件,則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。

    因此,在實(shí)驗(yàn)前,需要熟悉自己所使用的細(xì)胞系,并在實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格遵守所有產(chǎn)品的操作說明。 

    在實(shí)驗(yàn)過程中,作為實(shí)驗(yàn)小白,我們應(yīng)該如何應(yīng)對相關(guān)問題呢?現(xiàn)在我們一起來看看!

    一、如何挑選適合自己細(xì)胞生長的培養(yǎng)基呢?

    選擇培養(yǎng)基沒有確切的標(biāo)準(zhǔn),有幾點(diǎn)建議可供參考:

    1.建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首xuan的培養(yǎng)基。可以查閱ATCC或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢供應(yīng)商。

    2.根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640。

    3.其他實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。

    4.也可用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,觀察其生長狀態(tài),可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷,根據(jù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果選擇*培養(yǎng)基,這是客觀的方法,但比較繁瑣。

    二、如何正確地保存培養(yǎng)基?

    普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已開封建議3周內(nèi)使用。未開封的培養(yǎng)基,一般可穩(wěn)定保存1年。

    三、培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么?導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些?

    酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。

    1.培養(yǎng)基顏色變黃,原因有:培養(yǎng)基中細(xì)胞代謝產(chǎn)物為酸性,培養(yǎng)瓶受污染,細(xì)菌代謝產(chǎn)酸等導(dǎo)致。

    2.培養(yǎng)基顏色偏暗紅色,原因有:培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會(huì)隨著堿性增加而更偏暗紅。

    四、我感覺自己的培養(yǎng)基污染了,這要怎么進(jìn)行測試呢?

    取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無菌蛋白凍niu肉膏培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h,觀察有無雜菌生長(肉眼即可觀察到)。

    五、如果我的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

    一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素,建議避光保存在4℃冰箱且在2周內(nèi)用完。因?yàn)橐恍┛股睾脱宓幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解了。

    六、培養(yǎng)基怎么有沉淀了,這是怎么回事?怎么預(yù)防處理沉淀?

    1.首先判斷培養(yǎng)基是否已經(jīng)污染,其次,若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的,此沉淀對細(xì)胞培養(yǎng)無影響。若沉淀為結(jié)晶,有可能是因?yàn)橄蚺囵B(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度,使一些無機(jī)鹽析出。

    2.可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些沉淀,盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

    七、那我什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢?

    研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),用不加酚紅的培養(yǎng)基;一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時(shí),為了避免酚紅干擾檢測,也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

    八、為什么培養(yǎng)基中會(huì)含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉,它們的作用是什么?

    L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

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