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技術(shù)文章

ELISA實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題2022已更新

閱讀:907          發(fā)布時(shí)間:2022-12-27

ELISA實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)單,步驟少,流程短,試劑盒操作相對(duì)簡(jiǎn)便,實(shí)驗(yàn)小白也能輕松上手。然而,實(shí)驗(yàn)上手雖快,想要得到可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,卻并不那么容易。為了更好地助力科研實(shí)驗(yàn),恒遠(yuǎn)生物在這里將大家關(guān)心的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題整理如下:

一、關(guān)于試劑盒:


1.你們的ELISA試劑盒能檢測(cè)什么物種?

目前我們的試劑盒檢測(cè)的種屬主要為人、小鼠、大鼠、猴、兔、豬、雞、植物等,種屬齊全。如果試劑盒的命名帶有特定指向(如人),代表專門針對(duì)此物種;沒(méi)有指明物種,則代表該試劑盒在目前公司產(chǎn)品涉及的種屬(例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等)內(nèi)通用;其他特殊種屬的檢測(cè)適用性,請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持確認(rèn)。


2.96TELISA試劑盒能檢測(cè)多少樣本?是否需要做復(fù)孔?

為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,我們建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都做復(fù)孔,但并不強(qiáng)行要求ELISA實(shí)驗(yàn)一定要做復(fù)孔/3復(fù)孔,客戶可根據(jù)自己的需求設(shè)定復(fù)孔實(shí)驗(yàn),具體實(shí)驗(yàn)情況可咨詢恒遠(yuǎn)生物技術(shù)指導(dǎo)。


3.需檢測(cè)的樣品較多,能否減少標(biāo)曲的孔數(shù)?

為保證結(jié)果的準(zhǔn)確度,不建議減少標(biāo)曲的孔數(shù),請(qǐng)確保能夠檢測(cè)至少6個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)品濃度(含空白孔)。


4.ELISA試劑盒要使用多次,但樣本較多,是否可以只做一次標(biāo)曲?

雖然ELISA實(shí)驗(yàn)的操作步驟相同,但每次實(shí)驗(yàn)的各種影響因素都會(huì)有所變化。所以,每次實(shí)驗(yàn)時(shí),都必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以得到更準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果。如果需要做多次實(shí)驗(yàn),溶解后的高濃度標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝保存于-20℃條件下,避免反復(fù)凍融,半個(gè)月內(nèi)使用有效。


二、關(guān)于樣本


1.血清血漿樣本應(yīng)該選用哪種真空采血管收集?

血清:不含抗凝劑的采血管/含促凝劑采血管(通常為紅色、黃色、橘色管蓋的采血管)

血漿:含抗凝劑的采血管(通常為綠色、紫色管蓋的采血管)


樣品收集后,若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),可保存于2-8℃條件下;若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃條件下(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))或-80℃條件下(3個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融。檢測(cè)前,應(yīng)緩慢融化冷凍過(guò)的樣本,并離心除去凍融過(guò)程中產(chǎn)生的沉淀物。


2. 采集時(shí),如何盡可能避免溶血現(xiàn)象?

溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外,機(jī)械性強(qiáng)力振蕩、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。為避免溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響,應(yīng)注意:


(1)靜脈采血時(shí),回抽壓力不宜過(guò)大;


(2)一次性采血量不宜過(guò)少;


(3)采集的全血不宜激烈振蕩;


(4)離心轉(zhuǎn)速不宜過(guò)大;


(5)收集的全血需盡快處理成血清/血漿,全血不能凍融;


(6)若需要麻醉采血,需使用沒(méi)有溶血作用的麻醉劑。


3.組織/細(xì)胞樣本收集中提到的“反復(fù)凍融",過(guò)程應(yīng)該如何操作?

(1)組織樣本:組織研磨后,將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h,再置于30℃水浴鍋中輕微振蕩,使其迅速融化,反復(fù)操作1-2次即可;

(2)細(xì)胞樣本:按上述操作步驟,反復(fù)凍融2-3次。若為膜蛋白,可以適當(dāng)做超聲處理,但需要控制好超聲的溫度、頻率;


4.怎樣判斷我的樣本是否需要稀釋或做其他處理?

試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍,建議實(shí)驗(yàn)前通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度,并通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本的實(shí)際濃度情況。如果是常規(guī)樣本類型,可以咨詢ELISA技術(shù)支持,以獲取樣本的推薦稀釋倍數(shù),并安排預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè);如果樣品中待測(cè)物的濃度過(guò)高或過(guò)低,請(qǐng)對(duì)樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s;如果樣本中的分析物濃度遠(yuǎn)低于試劑盒的檢測(cè)限,建議選擇靈敏度更高的試劑盒來(lái)檢測(cè)。


更多實(shí)驗(yàn)問(wèn)題可咨詢我司業(yè)務(wù)員,為您提供專業(yè)的技術(shù)指導(dǎo)。

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