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技術(shù)文章

脂肪酶活性測定方法

閱讀:3410          發(fā)布時(shí)間:2011-10-12

方法:

1、粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸餾水溶解并定容至100 mL, 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

2、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)以10 mL色拉油為底物,以酶用量、水解溫度、反應(yīng)時(shí)間為因素,通過酸價(jià)的測定選定其水解的*條件。

3、酸價(jià)的測定

酸價(jià)是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數(shù), 它用于衡量油脂的水解程度。實(shí)驗(yàn)中用酸堿滴定法測定水解液的酸價(jià), 參照文獻(xiàn)[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 搖勻, 終止反應(yīng), 并加入2滴酚酞指示劑, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色, 在30 s內(nèi)不消失為終點(diǎn), 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(shù)(V ) 。用同樣的方法測定空白值, 每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)兩次, 以平均值作為測定結(jié)果。

酸價(jià)按下式計(jì)算:
X = C (V - V0 ) ×40 /M
式中: X —油脂酸價(jià)(mgNaOH /g油)
C—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L)
M —試樣的質(zhì)量( g)
40—NaOH的mmol質(zhì)量(mg/mmol)

4 粗脂肪活力的測定

在*水解條件下, 分別測得粗脂肪酶和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶水解液的酸價(jià)X1、X2 , 根據(jù)公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1為粗脂肪酶活力, U為標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶活力。

上海恒遠(yuǎn)生物產(chǎn)品目錄參見:http://www.gbdelisa.com

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