国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當(dāng)前位置:
上海恒遠生物科技有限公司>技術(shù)文章>質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實驗操作步驟

技術(shù)文章

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實驗操作步驟

閱讀:1264          發(fā)布時間:2024-10-15

1.基本原理 

將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細菌的過程稱為轉(zhuǎn)化( Transformation )。此感受態(tài)細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細菌表面,經(jīng) 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長數(shù)小時后,球狀細胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細菌中,外源基因得到表達。在選擇性培養(yǎng)平板上,可選出所需的轉(zhuǎn)化子(即含有質(zhì)粒 DNA 的細菌)。鈣處理的感受態(tài)細胞,一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ~ 10 6 個轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)方法轉(zhuǎn)化細菌外,還有電穿孔法( Electroporation ),其轉(zhuǎn)化率可高達 10 9 ~ 10 10 個轉(zhuǎn)化子 /μg 質(zhì)粒 DNA 。
 
2.器材 
①培養(yǎng)皿  ②恒溫培養(yǎng)箱
 
3.試劑 
① LB 培養(yǎng)基
②選擇性 LB 瓊脂培養(yǎng)平板(含氨芐青霉素,終濃度為 50μg/ml )
③氨芐青霉素 100 mg/ml
④宿主細菌:經(jīng) 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)細菌 DH5α
 
4.操作步驟 
①取 50 μL 大腸桿菌感受態(tài)細胞,加入適量質(zhì)粒(體積不得超過 4 μL )冰浴 30 min 后, 42℃ 熱激 90 s ,馬上放回冰上,冰浴 2 min ;
②加 400 μL LB 培養(yǎng)基,于 37℃ 搖床慢搖振蕩培養(yǎng) 45-60 min ;
③取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素( 100 μg/mL )的 LB 固體培養(yǎng)基上, 37℃ 倒置培養(yǎng)過夜。
 
更多實驗資訊可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海恒遠生物專業(yè)提供生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù),提供專業(yè)實驗技術(shù)服務(wù),為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動的時間和精力,我們有過硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù),購買ELISA試劑盒贈送免費代測服務(wù),在線一對一技術(shù)指導(dǎo),為您解決后顧之憂。


收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 產(chǎn)品對比 聯(lián)系電話 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪
18221656311
在線留言
周口市| 六安市| 且末县| 韶关市| 吉水县| 闵行区| 石棉县| 临湘市| 屯留县| 定日县| 巨鹿县| 竹溪县| 罗江县| 时尚| 长宁区| 留坝县| 永顺县| 龙州县| 渑池县| 荔浦县| 上思县| 阿克| 永胜县| 嘉鱼县| 无为县| 红桥区| 巍山| 陆丰市| 辽阳市| 固阳县| 瓮安县| 会泽县| 枞阳县| 拜城县| 商河县| 土默特左旗| 饶河县| 桐梓县| 天水市| 泗阳县| 平远县|