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技術文章

ELISA試劑盒實驗步驟

閱讀:2488          發(fā)布時間:2013-3-14

 ELISA試劑盒實驗步驟

 


1.試劑準備:陽性對照品,酶標抗體,底物,

2.樣品提?。核韫ぞ撸ㄑ欣彛?/span>

3.設計酶標板布局;設兩個陽性對照,兩個空白對照(空白對照孔不加樣品  及酶標試劑,其余各步驟操作相同),樣品孔。

4.加樣品到反應孔;每個孔100ul

5孵育(室溫下2小時)一般均采用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應,操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內,標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

6酶標抗體的制備

7洗板;孵育結束后,將反應孔中試劑倒出,加入250ul的1倍PBST緩沖液,之后快速倒出,重復2次。

8加酶標抗體;每孔100ul

9孵育;室溫2小時

10PNP底物的制備

11洗板

12加底物

13孵育;30到60分鐘

14終止反應;50ul 3摩爾的氫氧化鈉(選作)

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