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技術(shù)文章

人可溶性腫瘤壞死因子酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

閱讀:1384          發(fā)布時間:2013-3-21

RD“人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體試劑盒 "質(zhì)量保證,公司主要供應人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、犬、雞、馬、猴、羊、豬、牛等各類植物動物ELISA試劑盒,更多信息歡迎您。

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人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體試劑盒規(guī)格:96人份/48人份

英文名稱:Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA  KIT

保存條件:2-8

檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

經(jīng)營種類:進口分裝和原裝

主要作用:科研

產(chǎn)品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務.。

預期應用:ELISA法定量測定血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體試劑盒含量。

實驗原理:

  

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠皮質(zhì)酮(CORT)水平。用純化的大鼠皮質(zhì)酮(CORT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入皮質(zhì)酮(CORT),再與HRP標記的羊抗鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠皮質(zhì)酮(CORT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD,通過標準曲線計算樣品中大鼠皮質(zhì)酮(CORT)濃度。

   試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(160pg/ml

0.5ml×1

3

酶標包被板

12×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

80pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40pg/ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20pg/ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10pg/ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5pg/ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

    公司秉承“專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務,力求為我國科研事業(yè)添磚加瓦。

 

 公司主頁:http://www.gbdelisa.com/

 

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