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技術(shù)文章

細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法

閱讀:1416          發(fā)布時(shí)間:2013-7-12

 細(xì)胞凋亡也就是實(shí)驗(yàn)中常說(shuō)的程序性細(xì)胞死亡,它是一種不同于壞死的由基因調(diào)控的細(xì)胞主動(dòng)性死亡過(guò)程,是細(xì)胞在一定的生理或病理狀態(tài)下,遵循自身的程序,自己結(jié)束自己生命的過(guò)程,zui后細(xì)胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體,而被其他細(xì)胞吞噬。

檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法:

 

光學(xué)顯微鏡檢查:

細(xì)胞涂片或組織切片在PAS或HE染色后,即可在油鏡下觀(guān)察,若同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞免疫組化研究,則可判別AP細(xì)胞種類(lèi)。

判斷標(biāo)準(zhǔn):

①散在單個(gè)細(xì)胞。

②細(xì)胞體積縮小。

③輪廓清楚,常有一環(huán)形的空白區(qū),胞漿嗜酸性。

④核濃縮,邊聚碎裂呈分散的嗜堿性塊。

⑤胞內(nèi)凋亡小體。

⑥無(wú)炎癥反應(yīng)。

電子顯微鏡檢查 

電鏡是觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)的方法。細(xì)胞核和細(xì)胞器亞微結(jié)構(gòu)清晰易辨,尤其是電子顯微鏡與數(shù)字圖形處理系統(tǒng)結(jié)合可觀(guān)察到超微結(jié)構(gòu)更細(xì)微的變化。雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見(jiàn)胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀(guān)察難以令人滿(mǎn)意,而透射電鏡可清楚地觀(guān)察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時(shí)期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀(guān)察是迄今為止判斷凋亡zui經(jīng)典、zui可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。Ap過(guò)程的重要變化是細(xì)胞染色體的碎片狀分解,細(xì)胞器變化和生物膜呈空泡狀。電鏡標(biāo)本的制備同常規(guī)處理,電鏡下可見(jiàn)Ap細(xì)胞體積縮小,小體積細(xì)胞比例增高。細(xì)胞表面纖毛喪失,細(xì)胞核沿核膜內(nèi)側(cè)邊緣開(kāi)始固縮,電子密度升高。在初期細(xì)胞器仍保持完整。掃描電鏡下Ab小體的表面生物膜形成大量氣泡和空泡,呈沸騰狀和凹陷狀變化;透射電鏡下則呈圓形結(jié)構(gòu),內(nèi)含多個(gè)或整個(gè)細(xì)胞器,也可含一部分細(xì)胞核。

 

 

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