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技術(shù)文章

豬瘟抗體ELISA實(shí)驗(yàn)操作要領(lǐng)

閱讀:1183          發(fā)布時(shí)間:2015-3-30

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)的趙老師于去年12月在我公司代測(cè)豬瘟抗體,白介素,干擾素等相關(guān)系列21個(gè)指標(biāo)的ELISA實(shí)驗(yàn)現(xiàn)需發(fā)表文獻(xiàn)特我公司關(guān)于豬瘟抗體等實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)操作流程,我司技術(shù)做出如下詳細(xì)解答

1.用包被液將豬瘟弱毒單抗純化聯(lián)抗原、豬瘟強(qiáng)毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋?zhuān)靠装?/SPAN>100μl,4濕盒放置一夜。
2.次日取出,甩去孔內(nèi)液體,3×3′沖洗。
3.將待檢血清以PBS液做400倍稀釋?zhuān)靠准?/SPAN>100μl同時(shí)將豬瘟陽(yáng)性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋?zhuān)趯?duì)照孔中加100μl。37溫育1.5h2h
4.重復(fù)第二步,取出,甩去孔內(nèi)液體,3×3′洗滌。
5.將兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體以PBS液做100倍稀釋?zhuān)靠准?/SPAN>100μl,37溫育1.5h2h。
6.重復(fù)第4步。
7.每孔加底物溶液100μl,室溫下觀察顯色反應(yīng)。當(dāng)陰性對(duì)照孔稍顯色時(shí),立即終止反應(yīng),并以陰性孔做空白對(duì)照。
8.每孔加終止液50μl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)的光密度。
(三)結(jié)果判定
在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上,OD≥0.2,為豬瘟弱毒抗體陽(yáng)性;OD0.2,為豬瘟弱毒抗體陰性。
在豬瘟強(qiáng)毒酶聯(lián)板上,OD≥0.5,為豬瘟強(qiáng)毒抗體陽(yáng)性;OD0.2,為豬瘟強(qiáng)毒抗體陰性。

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