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技術(shù)文章

恒遠(yuǎn)解析檢測(cè)VEGF促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的方法

閱讀:1469          發(fā)布時(shí)間:2015-5-26

          上海恒遠(yuǎn)生物解析檢測(cè)VEGF促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的方法

血管生成(Angiogenesis)是指從已有的毛細(xì)血管或毛細(xì)血管后靜脈發(fā)展而形成新的血管,主要包括:激活期血管基底膜降解;血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活、增殖、遷移;重建形成新的血管和血管網(wǎng),是一個(gè)涉及多種細(xì)胞的多種分子的復(fù)雜過程。血管形成是促血管形成因子和抑制因子協(xié)調(diào)作用的復(fù)雜過程,正常情況下二者處于平衡狀態(tài),一旦此平衡打破就會(huì)激活血管系統(tǒng),使血管生成過度或抑制血管系統(tǒng)使血管退化。

1.用牛腎上腺內(nèi)皮細(xì)胞(AEC)檢測(cè)VEGF活性

1)12孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔加0.5ml1×104牛腎上腺血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液。

2)用含0.2%明膠的PBS系列稀釋待測(cè)樣品,每孔加0.5ml稀釋樣品,以后隔天更換同樣濃度的稀釋樣品;對(duì)照孔加0.5ml細(xì)胞培養(yǎng)液。在37 5 CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)45天。

3)MTT法、[3H]脫氧胸苷摻入法或直接用胰蛋白酶消化后計(jì)數(shù)細(xì)胞的方法計(jì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞數(shù)。繪制劑量-反應(yīng)曲線,取能引起50%zui大增殖反應(yīng)的zui高樣品稀釋度為1U VEGF

上海恒遠(yuǎn)生物供應(yīng)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子試劑盒(英文:vascular endothelial growth factor,簡(jiǎn)稱:VEGF),早期亦稱作血管通透因子(英文:vascular permeability factor,簡(jiǎn)稱:VPF),是血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子(heparin-binding growth factor),可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生(induce angiogenesis in vivo)。本月主推大鼠,小鼠,人等種屬試劑盒,咨詢。

2.用人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVE)檢測(cè)VEGF活性

1)分離HUVE。取明膠包被的48孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔加6000個(gè)細(xì)胞,含15mmol/L Hepes、20%胎牛血清和抗生素的199培養(yǎng)液,以及用同樣培養(yǎng)液系列稀釋的待測(cè)樣品,總體積0.4ml。在37 5 CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時(shí)。

2)加入0.64μCi23.68kBq[3H]脫氧胸苷,繼續(xù)培養(yǎng)60小時(shí),用含1 BSApH7.5 Hank液洗滌各孔。用含0.1mol/L NaOH0.2mol/L Na2CO3溶液溶解細(xì)胞,釋放DNA。溶解物在液體閃爍計(jì)數(shù)儀上計(jì)數(shù)放射性摻入量,同上決定樣品中VEGF的含量。

 

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